题目内容
【题目】基因工程的第一步是获取目的基因。某科研工作者欲将人的胰岛素基因导入大肠杆菌，从而去获取更多的胰岛素。该科研工作者先从人体胰岛B细胞中获取胰岛素mRNA，然后再通过_______________过程去获得胰岛素基因即目的基因。
（1）基因工程的第二步是将目的基因和运载体进行重组。此时，需要选择合适的限制酶和_______酶。常用的运载体是细菌质粒（如图所示），质粒中ori为质粒复制所必需的DNA序列，启动子是使转录开始的一段DNA序列，终止子是提供转录终止信号的DNA序列。青霉素抗性基因作为__________基因，以便于筛选。质粒上还有多种限制酶的切点，若目的基因上也有相应限制酶切点，为避免自身环化并确保目的基因与图中质粒准确重组，可选用的限制酶是_____。
A. NdeI和XbaI B．NdeI和BamHI
C．XbaI D．PstI E．BamHI
【答案】逆转录 DNA连接 标记 B
【解析】
基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
基因工程的第一步是获取目的基因，获取的方法包括从某种生物体细胞中分离和化学方法人工合成。获取人的胰岛素基因，反转录法的做法是从人体胰岛B细胞中获取胰岛素mRNA，再通过逆转录过程获取目的基因。
（1）将目的基因和运载体重组时需要选择合适的限制酶和DNA连接酶，以保留ori、启动子、终止子，同时保留青霉素抗性基因作为标记基因，以便于筛选。为避免目的基因自身的环化并能与图中质粒准确重组，应选用两种不同的限制酶，可选用的限制酶是NdeI和BamHI，选择NdeI和XbaI会导致终止子被切除。B正确。
