Question

【题目】基因工程的第四步是筛选导入重组质粒的受体细胞。

（1）作为受体大肠杆菌不应含有青霉素抗性基因，原因是___________________________。

（2）用培养基筛选导入了重组质粒的受体大肠杆菌，制备时除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外还应加入物质应包括____

A．细胞分裂素 B．琼脂 C．噬菌体 D．青霉素

（3）培养基配制和灭菌时，灭菌与调节pH的先后顺序是__________。检测该菌的数量可采用稀释涂布平板法计数，用该法接种培养后可得到图中________（A / B）所示的结果。

（4）假如基因工程改造的是细菌，规模化生产并提纯分泌型脂肪酶，需要加入硫酸铵使酶蛋白与其他杂质分离，这属于酶分离提纯步骤中的______。为了便于重复使用，制得的脂肪酶往往要固定化。图为固定化与非固定化脂肪酶的相对酶活性与温度的关系，比较图的两条曲线，写出固定化酶的优势是_________，劣势是__________。

Answer 1

【答案】B D 先调节pH后灭菌 B 沉淀 在30℃以上的较高温度下也有较高的酶活性 在20-30℃之间固定化酶的活性比较低

【解析】

从功能上看，培养基中含有青霉素，属于选择培养基；从物理状态上来说，培养基属于固体培养基。采用的接种方法有稀释涂布平板法和平板划线法。常用的灭菌方法有高压蒸汽灭菌、灼烧灭菌和干热灭菌。

（1）如用大肠杆菌作为受体细胞，若大肠杆菌含有青霉素抗性基因则会干扰筛选，因此该大肠杆菌中不应含有青霉素抗性基因。
（2）培养导入了重组质粒的大肠杆菌时，需配制培养基。该培养基除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外，还应加入的物质有琼脂和青霉素。
（3）培养基配制和灭菌时，先调节PH后灭菌。获得图A效果是线性分布，接种方法是划线法；获得图B效果是均匀分布的，接种方法是涂布法。
（4）加入硫酸铵使酶蛋白与其他杂质分离，这属于酶分离提纯步骤中的沉淀；图3为固定化与非固定化脂肪酶的相对酶活性与温度的关系，比较图3中的两条曲线变化趋势可知：固定化酶的优势是在30℃以上的较高温度下也有较高的酶活性，劣势是在20-30℃之间固定化酶的活性比较低。