Question

【题目】科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如下图：

（1）步骤①的技术名称是__________________________。

（2）将基因导入ES细胞而不是导入到上皮细胞是因为ES细胞具有__________________。

（3）步骤③中，需要构建含有干扰素基因的_____________________，据下图，对干扰素基因片段和质粒进行酶切时，可选用的限制酶组合为_________________或_________________。

（4）为了得到实验所需的大量干扰素基因，研究人员利用PCR 技术进行扩增。由于DNA复制时，子链只能由5′向3′方向延伸，因此可以从上图A、B、C、D四种单链DNA片段中选取____________________作为引物。若要将1个干扰素基因复制10 次，则需要在缓冲液中至少加入________个引物。

（5）将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察，选择发_____________色荧光的细胞进行体外诱导。为检测干扰素基因是否表达，可以采用_________________________的方法。

Answer 1

【答案】动物体细胞核移植技术 发育的全能性 基因表达载体 HindⅢ和PstⅠ EcoRⅠ和PstⅠ B和C 211-2 绿 抗原—抗体杂交

【解析】

分析最上面的图：①表示核移植过程；②表示早期胚胎培养过程；③表示将目的基因导入ES细胞。

分析中间的图：该DNA片段含有四种限制酶识别序列和切割位点，其中SamⅠ酶的识别序列和切割位点位于目的基因上。

分析最下面的图：为质粒结构示意图，该质粒含有2个标记基因（红色荧光标记基因和绿色荧光标记基因）。

（1）步骤①的技术名称是动物体细胞核移植技术，将体细胞核移植到去核的卵母细胞中。

（2）将基因导入ES细胞而不是导入到上皮细胞是因为ES细胞具有全能性，能够发育成个体，而上皮细胞不能。

（3）步骤③是将目的基因导入ES细胞，该过程之前需要构建基因表达载体；由图可知，SamⅠ酶的识别序列和切割位点位于目的基因上，用该酶切割会破坏目的基因，因此对干扰素基因片段和质粒进行酶切时，可选用限制酶HindⅢ和PstⅠ或EcoRⅠ和PstⅠ。

（4）因此构建前利用PCR技术扩增干扰素基因时，可以从图2中A、B、C、D四种单链DNA片段中选取B和C作为引物，A和D的方向都是从3′向5′PCR 技术大量扩增目的基因时，缓冲液中需要加入的引物个数计算公式为2n+1-2，所以若将1个目的基因分子复制10 次，则需要在缓冲液中至少加入211-2=个引物。

（5）用限制酶HindⅢ和PstⅠ或EcoRⅠ和PstⅠ切割时会破坏红色荧光蛋白基因，但不会破坏绿色荧光蛋白基因，因此将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察，选择发绿色荧光的细胞进行体外诱导。为检测干扰素基因是否表达，可以采用抗原-抗体杂交法。