题目内容

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的下列操作中需要在火焰旁进行的一组是
①土壤取样 ②称取土壤 ③稀释土壤溶液 ④涂布平板 ⑤微生物的培养

D
应在火焰旁称取土壤 10 g。将称好的土样倒入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，塞好棉塞。在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行。涂布平板在火焰旁，防止杂菌污染，所以D选项正确。

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微生物与人类关系密切。虽然有些微生物能使动植物患病，但多数微生物对人类是有益的，请回答下列有关问题：

(1)下表为两种微生物的培养基配方。

KH₂P0₄	Na₂HP0₄	MgS0₄·7H₂0	葡萄糖	尿素	琼脂
1.4g	2.1g	0.2g	10.0g	1.0g	15.0g

纤维素粉	NaN0₃	Na₂HP0₄·7H₂0	KH₂P0₄	MgS0₄·7H₂0	KCl	酵母膏	水解酪素
5g	lg	1.2g	0.9g	O.5g	0.5g	O.5g	0.5g

上述两种培养基中的物质溶解后，均用蒸馏水定容到1000 mL。

①如果要进行土壤中分解尿素的细菌的分离，则需要选择上述哪种培养基?___________，该培养基能分离尿素分解菌的原因是______________________________________________。

②在该培养基中可加入_________指示剂，根据指示剂的颜色可鉴定该种细菌能够分解尿素。

③从功能上来看，上述两种培养基均属于_______________________________培养基。

(2)在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的倒平板操作时，平板冷凝后，应将平板___________放置，这样做的目的是可防止__________________________________________造成污染。

(3)微生物接种的方法很多，在用平板划线法操作结束时，为什么仍需要灼烧接种环?__________________________________________________________________________。

（8分）【生物一生物技术实践】
尿素是一种高浓度氮肥且长期施用没有不良影响，但尿素只有通过土壤中某些细菌分解为氨后，才能被植物吸收利用。分解尿素的细菌都能合成脲酶，脲酶能催化尿素水解。
某同学要分离土壤中能分解尿素的细菌，并统计每克土壤样品中活菌数目，培养基配方如下：

KH₂PO₄	Na₂HPO₄	MgSO₄·7H₂O	蛋白胨	葡萄糖	尿素	琼脂
1.4g	2.1g	0.2g	1.0g	10.0g	1.0g	15.0g

在生物技术实践过程中，往往需要注意某些实验步骤的操作，请将下列实验中的注意事项填写完整：

⑴在腐乳的制作时，用来腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干净后要用????????? 消毒；在血红蛋白的提取和分离中，若红细胞的洗涤次数过少，将无法除去????????? 。

⑵在提取植物细胞的DNA时，需要先用洗涤剂溶解???????? 。在花药离体培养中剥离花药时，要彻底去除????????? ，因为与其相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。

⑶在“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”课题中，往往需要稀释土壤溶液，为了避免杂菌污染，此过程每一步都要在????????? 旁操作。在固定化酵母细胞中加热溶解海藻酸钠时，最好采用????????? 的方法。胡萝卜素提取的萃取过程应采用????????? 加热，因为有机溶剂都是易燃物。

⑷为避免外源DNA等因素的污染，PCR实验中使用的微量离心管、枪头、缓冲液和蒸馏水等在使用前必须进行?????????? 。

在做土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验时，甲组实验用以尿素为唯一氮源的培养基，乙组实验的培养基中的氮源除尿素外还含有硝酸盐，其他成分都相同，在相同条件下操作，培养观察，则乙组实验属于

A．空白对照　 B．标准对照　 C．相互对照　 D．条件对照

土壤是“微生物的天然培养基”，下面是有关土壤中分解尿素的细菌分离和计数的实验过程，请根据下图回答相关问题：

(1)能分解尿素的细菌代谢类型为＿＿，应从富含有机质的土壤表层取土样。

(2)为分离出土壤中分解尿素的细菌，应该用的培养基进行分离，并加入＿＿＿指示剂进行鉴别。

(3)若取土样5g，应加入＿＿ml的无菌水配制成稀释10倍土壤溶液。因土壤中细菌密度很大，需要不断加以稀释，配制成如图所示的不同浓度的土壤溶液。取样稀释前，一定要＿＿＿以减少误差。将10³-10⁷倍的稀释液分别吸取0.1mL加入到固体培养基上，用＿＿＿＿将菌液铺平。这种接种方法称为＿＿＿＿。

(4)将接种的培养皿放置在37℃恒温培养箱中培养24h～48h，观察并统计具有＿＿＿＿(现象)的菌落数，结果如下表，其中＿＿＿＿倍的稀释比较合适。

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