题目内容
【题目】内皮素(ET)自1988年发现以来,一直是人们研究的热点。它不仅存在于血管内皮,也广泛存在于各种组织和细胞中,是调节心血管功能的重要因子,对维持基础血管张力与心血管系统稳态有重要作用。内皮素主要通过与靶细胞膜上的内皮素受体结合而发挥生物学效应。ETA是内皮素的主要受体,科研人员试图通过构建表达载体,实现ETA基因在细胞中高效的表达,其过程如图所示,图中SNAP基因是一种荧光蛋白基因,限制酶ApaⅠ的识别序列为,限制酶XhoⅠ的识别序列为。请据图分析并回答下列问题:
(1)进行过程①时,需要加入缓冲液、引物、dNTP和 酶等。完成过程①②③的目的是 。
(2)过程③和⑤中,限制酶XhoI切割DNA,使磷酸二酯键断开,形成的黏性末端是 。用两种限制酶切割获得不同的黏性末端,其主要目的是 。
(3)构建的重组表达载体,目的基因上游的启动子的作用是 ,除图示结构外,完整的基因表达载体还应具有 等结构(至少写出两个结构)。
(4)过程⑥要CaCl2预先处理大肠杆菌,使其成为容易吸收外界DNA的 细胞。
(5)利用SNAP基因与ETA基因结合构成融合基因,目的是 。
(6)人皮肤黑色素细胞上有内皮素的特异受体,内皮素与黑色素细胞膜上的受体结合后,会刺激黑色素细胞的分化、增殖并激活酪氨酸酶的活性,从而使黑色素急剧增加。美容时可以利用注射ETA达到美白祛斑效果,试解释原因: 。
【答案】
(1)反转录(逆转录) 获取目的基因(ETA基因)
(2) 使目的基因定向连接到载体上,以防止目的基因自身环化
(3)RNA聚合酶识别和结合的部位,驱动基因的转录 复制原点、终止子
(4)感受态
(5)检测ETA基因能否表达及表达量
(6)ETA能与内皮素结合,减少了内皮素与黑色素细胞膜上内皮素受体的结合,抑制了内皮素对黑色素细胞的增殖和黑色素的形成
【解析】