pBR322质粒是基因工程中经常选用的工具.如图Ⅰ所示. I．目的基因如果插入质粒的某抗性基因中.将使该基因失活.为了检查运载体是否导入原本无Ampr 和Tetr的大肠杆菌.将大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养.得到如图Ⅱ的菌落.再将灭菌绒布按到培养基上.使绒布面沾上菌落.然后将绒布按到含四环素的培养基上培养.得到如图Ⅲ的结果(� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

题目内容

（18分） pBR322质粒是基因工程中经常选用的工具，如图Ⅰ所示。

I．目的基因如果插入质粒的某抗性基因中，将使该基因失活。为了检查运载体是否导入原本无Amp^r 和Tet^r的大肠杆菌，将大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养，得到如图Ⅱ的菌落。再将灭菌绒布按到培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图Ⅲ的结果（空圈表示与Ⅱ对照无菌落的位置）。

（1）．pBR322质粒在基因工程中的作用是。

（2）．下图是pBR322质粒上被某种酶识别的一段特定序列。a处被切割后，产生的暴露出来的单链碱基序列是。如果要从生物细胞中分离目的基因，首先需要进行基因定位，然后再用上述酶切割。将目的基因与质粒连接起来的酶作用于图中的处。

（3）与图Ⅲ空圈相对应的图Ⅱ中的菌落表现型是，由此说明目的基因插入了中。

II．下面是pBR322质粒的部分碱基序列，所编码蛋白质的氨基酸序列为“甲硫氨酸—精氨酸—谷氨酸—丙氨酸—天冬氨酸—缬氨酸…”（甲硫氨酸的密码子AUG也是起始密码子）。

则：①、②两单链作为转录模板链的是（填序号），该链转录产生的mRNA顺序是AUG ；如图中箭头所指碱基对G/C缺失，该基因相应片段编码的氨基酸序列为

（ 4分）。

【答案】

（18分，每空2分）I．（1）作为运载体（2）．－TGCA或ACGT－ a

（3）．能抗氨苄青霉素，但不能抗四环素 Tetr

II．② CGGGAGGCGGAUGUC…… 甲硫氨酸—精氨酸—谷氨酸—精氨酸—甲硫氨酸…4分

【解析】略

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目前基因工程所用的质粒载体主要是以天然细菌质粒的各种元件为基础重新组建的人工质粒，pBR322质粒是较早构建的质粒载体，其主要结构如图一所示。

（1）建构基因表达载体时，必须有、复制原点、目的基因、终止子以及。

（2）构建人工质粒时要有抗性基因，以便于。

（3）pBR322分子中有单个EcoRI限制酶作用位点，EcoRl只能识别序列—GAATTC一，并只能在G与A之间切割。若在某目的基因的两侧各有1个EcoRl的切点，请画出目的基因两侧被限制酶EcoRI切割后所形成的黏性末端。

（4）pBR322分子中另有单个的BamHI限制酶作用位点，现将经BamHI处理后的质粒与用另一种限制酶BglⅡ处理得到的目的基因，通过DNA连接酶作用恢复，成功获得了重组质粒。说明。

（5）为了检测上述重组质粒是否导入原本无amp^R和tet^R的大肠杆菌，将大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养，得到如图二的菌落；再将灭菌绒布按到培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图三的结果（空圈表示与图二对照无菌落的位置）。与图三空圈相对应的图二中的菌落表现型是。图三结果显示，多数大肠杆菌导入的是。

目前所用的质粒载体主要是以天然细菌质粒的各种元件为基础重新组建的人工质粒，pBR322质粒是较早构建的质粒载体，其主要结构如图所示。

(1)构建人工质粒时要有抗性基因，以便于                              。
(2)pBR322分子中有单个EcoR I限制酶作用位点，EcoR 1只能识别序列一GAATTC一，并只能在G与A之间切割。若在某目的基因的两侧各有1个EcoR I的切点，请画出目的基因两侧被限制酶EcoR I切割后所形成的黏性末端。

(3)pBR322分子中另有单个的BamHI限制酶作用位点，现将经BamHI处理后的质粒与用另一种限制酶BgIⅡ处理得到的目的基因，通过DNA连接酶作用恢复___    ___ 键，成功的获得了重组质粒。
(4)为了检测上述重组质粒是否导入原本无ampR和tetR的大肠杆菌，将大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养，得到如图二的菌落。再将灭菌绒布按到培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图三的结果(空圈表示与图二对照无菌落的位置)。与图三空圈相对应的图二中的菌落表现型是___      _____ ，图三结果显示，多数大肠杆菌导入的是___           __。

（18分）pBR322质粒是基因工程中经常选用的工具，如图Ⅰ所示。

I．目的基因如果插入质粒的某抗性基因中，将使该基因失活。为了检查运载体是否导入原本无Amp^r和Tet^r的大肠杆菌，将大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养，得到如图Ⅱ的菌落。再将灭菌绒布按到培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图Ⅲ的结果（空圈表示与Ⅱ对照无菌落的位置）。
（1）．pBR322质粒在基因工程中的作用是            。
（2）．下图是pBR322质粒上被某种酶识别的一段特定序列。a处被切割后，产生的暴露出来的单链碱基序列是                                       。如果要从生物细胞中分离目的基因，首先需要进行基因定位，然后再用上述酶切割。将目的基因与质粒连接起来的酶作用于图中的       处。
（3）与图Ⅲ空圈相对应的图Ⅱ中的菌落表现型是                             ，由此说明目的基因插入了       中。
II．下面是pBR322质粒的部分碱基序列，所编码蛋白质的氨基酸序列为“甲硫氨酸—精氨酸—谷氨酸—丙氨酸—天冬氨酸—缬氨酸…”（甲硫氨酸的密码子AUG也是起始密码子）。

则：①、②两单链作为转录模板链的是     （填序号），该链转录产生的mRNA顺序是AUG                                                 ；如图中箭头所指碱基对G/C缺失，该基因相应片段编码的氨基酸序列为
                                                                    （ 4分）。

（11分）目前基因工程所用的质粒载体主要是以天然细菌质粒的各种元件为基础重新组建的人工质粒，pBR322质粒是较早构建的质粒载体，其主要结构如图一所示。

(1)构建人工质粒时要有抗性基因，以便于________。观察上图，如果A为质粒，则C表示。
(2)pBR322分子中有单个EcoRⅠ限制酶作用位点，EcoRⅠ只能识别序列—GAATTC—，并只能在G与A之间切割。若在某目的基因的两侧各有1个EcoRⅠ的切点，请画出目的基因两侧被限制酶EcoRⅠ切割后所形成的黏性末端。
_______________________________________________________________________
(3)pBR322分子中另有单个的BamHⅠ限制酶作用位点，现将经BamHⅠ处理后的质粒与用另一种限制酶BglⅡ处理得到的目的基因，通过____________作用恢复________________________键，成功地获得了重组质粒。能形成重组质粒的原因是_______________________________________________________________________
(4) 作为受体大肠杆菌应不含_______________________，以方便筛选已导入重组质粒的受体大肠杆菌。将大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养，得到如图二的菌落。再将灭菌绒布按到培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图三的结果(空圈表示与图二对照无菌落的位置)。与图三空圈相对应的图二中的菌落表现型是_______，图三结果显示，多数大肠杆菌导入的是______________。
（5）基因工程中使用的限制酶，其特点是_______________________，下图四种质粒含有E1和E2两种限制酶的识别，Apr表示抗青霉素的抗性基因，Tcr表示抗四环素的抗性基因。

将两端用E1切开的Tcr基因与用E1切开的质粒X－1混合连接，连接后获得的质粒类型有＿＿＿。（可多选）

（11分）目前基因工程所用的质粒载体主要是以天然细菌质粒的各种元件为基础重新组建的人工质粒，pBR322质粒是较早构建的质粒载体，其主要结构如图一所示。

(1)构建人工质粒时要有抗性基因，以便于________。观察上图，如果A为质粒，则C表示。

(2)pBR322分子中有单个EcoRⅠ限制酶作用位点，EcoRⅠ只能识别序列—GAATTC—，并只能在G与A之间切割。若在某目的基因的两侧各有1个EcoRⅠ的切点，请画出目的基因两侧被限制酶EcoRⅠ切割后所形成的黏性末端。

_______________________________________________________________________

(3)pBR322分子中另有单个的BamHⅠ限制酶作用位点，现将经BamHⅠ处理后的质粒与用另一种限制酶BglⅡ处理得到的目的基因，通过____________作用恢复________________________键，成功地获得了重组质粒。能形成重组质粒的原因是_______________________________________________________________________

(4) 作为受体大肠杆菌应不含_______________________，以方便筛选已导入重组质粒的受体大肠杆菌。将大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养，得到如图二的菌落。再将灭菌绒布按到培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图三的结果(空圈表示与图二对照无菌落的位置)。与图三空圈相对应的图二中的菌落表现型是_______，图三结果显示，多数大肠杆菌导入的是______________。

（5）基因工程中使用的限制酶，其特点是_______________________，下图四种质粒含有E1和E2两种限制酶的识别，Apr表示抗青霉素的抗性基因，Tcr表示抗四环素的抗性基因。

将两端用E1切开的Tcr基因与用E1切开的质粒X－1混合连接，连接后获得的质粒类型有＿＿＿。（可多选）A．X－1 B．X－2 C．X－3 D．X－4

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