题目内容
【题目】大肠杆菌是国际上公认的卫生监测指示菌,用于指示食品、饮用水等是否直接或间接受到了粪便的污染。少数微生物能分解乳糖,有些只产酸(酸性物质),有些只产气(气体),而大肠杆菌既能产酸又能产气,且产生的酸性物质能与伊红美蓝反应而呈现黑色。某小组为检测某水体中大肠杆菌的污染状况,选用了如下两种培养基。
培养基名称 | 配方(L-1) | pH |
乳糖蛋白胨培养基 | 蛋白胨10g,乳糖5g,牛肉膏3g,NaCl 5g,溴甲酚紫0.016g | 7.4 |
伊红美蓝培养基 | 蛋白胨10g,乳糖10g,KH2PO4 5g,伊红0.4g,美蓝0.065g,琼脂15g | 7.4 |
回答下列问题:
(1)从物理性质上看,两种培养基的类型__________(填“相同”或“不同”)。在乳糖蛋白胨培养基中,为微生物的生长提供氮源的物质有__________;NaCl除了提供无机盐外,还具有_________作用。
(2)乳糖蛋白胨培养基进行灭菌时,不选用121℃高压灭菌15 min的方法,而是选用115℃灭菌20 min,推测可能的原因是___________。
(3)某小组取两支含乳糖蛋白胨培养基的试管A和B,A管中加入1mL待测水样,B管不作处理,然后都放入培养箱中培养24h。已知溴甲酚紫在酸性时呈黄色,碱性时(pH高于6.8)呈紫色。若出现_________时,则提示水样可能被大肠杆菌污染。
(4)该小组为计数大肠杆菌的数目,同时还各取0.1 mL水样直接涂布到三个伊红美蓝平板培养基上进行培养,分别统计平板上的菌落数为34、36、38,估算出每毫升水样中含360个大肠杆菌。有同学指出,估算的大肠杆菌数目不可信,其原因有___________、__________。
【答案】不同 蛋白胨、牛肉膏 维持细胞渗透压 培养基中有不耐高温(121℃)的物质 A管呈黄色并产气,B管呈紫色不产气 应统计平板上呈现黑色的菌落 缺少不接种的空白对照
【解析】
1.培养基,是指供给微生物、植物或动物(或组织)生长繁殖的,由不同营养物质组合配制而成的营养基质。一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)、维生素和水等几大类物质。培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质,也是细胞生长和繁殖的生存环境。培养基种类很多,根据配制原料的来源可分为自然培养基、合成培养基、半合成培养基;根据物理状态可分为固体培养基、液体培养基、半固体培养基;根据培养功能可分为基础培养基、选择培养基、加富培养基、鉴别培养基等;根据使用范围可分为细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基、真菌培养基等。培养基配成后一般需测试并调节pH,还须进行灭菌,通常有高温灭菌和过滤灭菌。培养基由于富含营养物质,易被污染或变质。配好后不宜久置,最好现配现用。
2.稀释涂布平板法:稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落,即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法,即一个菌落代表一个单细胞。计数时,首先将待测样品制成均匀的系列稀释液,尽量使样品中的微生物细胞分散开,使成单个细胞存在(否则一个菌落就不只是代表一个细胞),再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中,使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后,由单个细胞生长繁殖形成菌落,统计菌落数目,即可计算出样品中的含菌数。此法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数,故又称活菌计数。一般用于某些成品检定(如杀虫菌剂等)、生物制品检验、土壤含菌量测定及食品、水源的污染程度的检验。
(1)从物理性质上看,两种培养基的类型不同,乳糖蛋白胨培养基是液体培养基,伊红美蓝培养基是固体培养基。在乳糖蛋白胨培养基中,蛋白胨、牛肉膏含有丰富的蛋白质,为微生物的生长提供氮源;NaCl除了提供无机盐外,Na+还具有维持细胞渗透压作用。
(2)乳糖蛋白胨培养基进行灭菌时,不选用121℃高压灭菌15 min的方法,而是选用115℃灭菌20 min,推测可能的原因是培养基中有不耐高温(121℃)的物质,如乳糖蛋白胨培养基的成分中含有乳糖,121℃灭菌会使乳糖会降解,碳化。
(3)某小组取两支含乳糖蛋白胨培养基的试管A和B,A管中加入1mL待测水样,B管不作处理,然后都放入培养箱中培养24h。已知溴甲酚紫在酸性时呈黄色,碱性时(pH高于6.8)呈紫色,大肠杆菌既能产酸又能产气,若出现A管呈黄色并产气,B管呈紫色不产气,则提示水样可能被大肠杆菌污染。
(4)该小组为计数大肠杆菌的数目,同时还各取0.1 mL水样直接涂布到三个伊红美蓝平板培养基上进行培养,分别统计平板上的菌落数为34、36、38,估算出每毫升水样中含360个大肠杆菌。有同学指出,估算的大肠杆菌数目不可信,其原因有:大肠杆菌产生的酸性物质能与伊红美蓝反应而呈现黑色,故应统计平板上呈现黑色的菌落,缺少不接种的空白对照,未排除其他因素的干扰。