题目内容
【题目】烧伤病人容易感染绿脓杆菌，引起化脓性感染。比阿培南、美罗培南、头孢菌素和碳青霉烯类抗生素都是非常经典的抗绿脓杆菌的药物。临床使用时，有时需要做细菌耐药实验。实验时，从病人身上获取少量样本，按下列一定的实验步骤操作，以确定病人体内的绿脓杆菌对不同抗生素的敏感性。
（1）获取绿脓杆菌单菌落
①配制培养基。主要步骤是计算→称量→溶化→_____→分装→倒平板。
②图2所示接种方法为_____法，这种方法的主要目的是使接种物_____。图1的操作中，第一次划线前灼烧接种环的目的是防止杂菌污染，第二次及之后的几次划线前灼烧接种环的目的是_____。在图2所示操作前，需要随机取若干灭菌后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目的是________。
（2）检测绿脓杆菌对不同抗生素的敏感度
绿脓杆菌对不同抗生素的敏感度的对比、对照实验结果如图3所示：在恒温箱培养3天后，培养基上有绿脓杆菌滋生，且除浸有无菌水的圆纸片外，其他浸有美罗培南、比阿培南、头孢菌素或碳青霉烯类抗生素的圆纸片周围都出现了抑菌环。
如果你是医生，建议患者最好选用_______抗生素，判断的的理由是________________。
（3）菌种保藏
将分离纯化后的菌株接种到__________上，在适宜条件下培养。当菌落长成后，将试管置于4℃冰箱中保藏待用。
（4）常采用_______法统计活菌数目
直接从静置的培养液中取样计数的做法是错误的，正确的操作是__________ 。
【答案】 调pH和灭菌 划线 逐步稀释（或单个菌落） 杀死上次划线后接种环上残留的菌种（使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端） 检测培养基平板灭菌是否合格 美罗培南 抑菌圈最大，说明对绿脓杆菌的杀伤效果最好 固体斜面培养基 稀释涂布平板法 将培养液摇匀后取样计数
【解析】由题意可知本题考查微生物的培养、纯化和计数相关知识，意在考察考生对知识点的识记理解掌握程度。
（1）①配制培养基。主要步骤是计算→称量→溶化→调pH和灭菌→分装→倒平板。
②分析图1到图2是平板划线法，这种方法的主要目的是使接种物逐步稀释（得到单个菌落）。在此操作中，第一次划线前灼烧接种环的目的是防止杂菌污染，第二次及之后的几次划线前灼烧接种环的目的是杀死上次划线后接种环上残留的菌种（使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端）。在图2所示操作前，需要随机取若干灭菌后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目的是检测培养基平板灭菌是否合格。
（2）抑菌圈越大说明抑菌效果越好，根据图形分析可知美罗培南的抑菌圈最大，说明效果最好，因此建议用美罗培南。
（3）保存菌种可以用临时保存法，即将分离纯化后的菌株接种到固体斜面培养基上，在适宜条件下培养。当菌落长成后，将试管置于4℃冰箱中保藏待用。
（4）活菌计数时为了数据的准确性不能从静置的培养液中直接取样计数，应将培养液摇匀后再进行计数。
