题目内容
【题目】下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉素抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ表示三种限制酶。请据图回答：
（1）从高表达人乳铁蛋白的组织细胞中提取mRNA，通过______过程获得cDNA，用于PCR扩增。
（2）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用______限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌，首先需要在含______的培养基上进行。
（3）能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是_____（填字母代号）。
A．启动子 B．tetR C．复制原点 D．ampR
（4）进行过程②之前，需用相应的激素处理代孕牛，使其处于______状态。
（5）对早期胚胎进行切割，可获得多个新个体，该种生殖方式属于_____生殖。
（6）为检测人乳铁蛋白基因是否转录，可采用______技术。
【答案】逆转录 BamHⅠ和HindⅢ 氨苄青霉素 A 同期发情 无性生殖（克隆） （DNA—RNA）分子杂交
【解析】
分析题图：图示是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线，包括基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、早期胚胎培养、胚胎移植等步骤，其中过程①是将重组质粒导入受体细胞；过程②需采用胚胎移植技术。
（1）以mRNA为模板合成DNA的过程称为逆转录。
（2）外源DNA分子上含有限制酶BamHI、Hindlll、Smal的切割位点，其中限制酶Smal的切割位点位于目的基因上，所以获取目的基因和构建基因表达载体时，应用限制酶HindⅢ和BamHI。用限制酶HindⅢ和BamHI切割质粒后，会破坏质粒上的四环素抗性基因，但不会破坏氨苄青霉素抗性基因，因此筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含氨苄青霉素的培养基上进行。
（3）启动子是能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列，A正确。故选A。
（4）将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；进行胚胎移植前，需要用相应的激素处理代孕牛，使其处于同期发情状态。
（5）来自同一个胚胎的后代具有相同的遗传物质，因此胚胎分割可以看做动物无性繁殖或克隆的方法之一。
（6）检测目的基因是否转录常用分子杂交技术。
【题目】Graves病（GD）可导致甲状腺功能亢进。研究发现，GD患者甲状腺细胞表面表达大量细胞间粘附分子1（ICAM-1），导致甲状腺肿大。科研人员通过制备单克隆抗体，对治疗GD进行了尝试。
（1）用ICAM-1作为抗原间隔多次免疫若干只小鼠，几周后取这些免疫小鼠的血清，分别加入多孔培养板的不同孔中，多孔培养板中需加入________以检测这些小鼠产生的抗体。依据反应结果，选出抗原-抗体反应最________（强/弱）的培养孔所对应的小鼠M。
（2）取小鼠M的脾脏细胞制备成细胞悬液，与实验用骨髓瘤细胞进行融合，用选择培养基筛选得到具有________能力的细胞。核苷酸合成有两个途径，物质A可以阻断其中的全合成途径（如下图）。正常细胞内含有补救合成途径所必需的转化酶和激酶，制备单克隆抗体时选用的骨髓瘤细胞中缺乏转化酶。可用加入H、A、T三种物质的“HAT培养基”筛选特定的杂交瘤细胞。
融合前将部分培养细胞置于含HAT的选择培养基中培养，一段时间后培养基中________（有/无）骨髓瘤细胞生长，说明培养基符合实验要求。杂交瘤细胞可以在HAT培养基上大量繁殖的原因是________________。
（3）将获得的上述细胞在多孔培养板上培养，用ICAM-1检测，从中选择________的杂交瘤细胞，植入小鼠腹腔中克隆培养，一段时间后从小鼠腹水中提取实验用抗体。
（4）若进一步比较实验用抗体和131I对GD模型小鼠的治疗作用，可将若干GD模型小鼠等分为三组，请补充下表中的实验设计。
对照组（A） | 131I治疗组（B） | 单克隆抗体治疗组（C） |
给GD模型小鼠腹腔注射0．1mL无菌生理盐水 | 给GD模型小鼠腹腔注射溶于0．1mL无菌生理盐水的131I | ________ |
【题目】为了培育高效利用木糖发酵产乳酸的菌株，科研人员将能利用木糖产乳酸的菌种搭载于中国“实践八号”育种卫星，卫星返回后进行筛选，其主要流程如下图，其中乳酸能溶解培养基中的碳酸钙形成透明圈。请回答：
（1）与步骤②相比，步骤③的培养基成分还含有__________、___________。两培养基均以木糖作为唯一碳源的目的是___________。
（2）步骤③中，应在_____________附近倒平板，不采用涂布平板接种的原因是___________________________________________________________。平板在适宜条件下培养一段时间后，筛选有透明圈的菌落作为候选菌，这里的准确筛选的主要依据是_______________________________________。
（3）按功能分，步骤③中培养基属于______________________培养基。
（4）科研人员从候选菌中初步筛选出产乳酸能力较强的四种菌株，再通过连续转接和液体发酵进行遗传稳定性检测，得到下表所示结果（单位：g/L），最终确定卫10为最优菌株，依据是___________。
传代次数 | 菌株 | |||
卫10 | 卫32 | 卫56 | 卫69 | |
2 | 70.78 | 71.23 | 70.52 | 69.24 |
5 | 70.23 | 69.52 | 67.46 | 65.56 |
8 | 69.58 | 62.16 | 60.52 | 61.53 |
11 | 70.75 | 55.69 | 52.42 | 55.72 |
14 | 69.42 | 42.28 | 40.22 | 44.38 |
（5）若要进一步探究卫10发酵的最适木糖浓度，试写出实验思路___________________________。
