题目内容

【题目】下图是科研人员用海藻酸钠固定双歧杆菌并研究固定后双歧杆菌繁殖能力的过程,相关叙述正确的是(  )

A. 步骤①的目的是获得代谢旺盛的双歧杆菌

B. 步骤②需控制凝胶珠在NaCl溶液中的浸泡时间

C. 步骤③之前应计算凝胶珠中双歧杆菌的平均数

D. 步骤⑤可利用稀释涂布平板法接种双歧杆菌并计数

【答案】ACD

【解析】

根据题干信息可知,该实验的目的是用海藻酸钠固定双歧杆菌并研究固定后双歧杆菌繁殖能力的过程,可以根据固定化酵母细胞的实验分析答题。

步骤①是对双歧杆菌的密封培养,目的是获得代谢旺盛的双歧杆菌,A正确;步骤②是将针筒中的溶液注射到氯化钙溶液中形成凝胶珠,需要控制凝胶珠在氯化钙溶液中的浸泡时间,B错误;步骤③密封培养之前,应该计算出凝胶珠中双歧杆菌的平均数,C正确;微生物的常用接种方法有平板画线法和稀释涂布平板法,后者可以用于菌种的计数,因此步骤⑤可利用稀释涂布平板法接种双歧杆菌并计数,D正确。

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【题目】科研人员运用两种方法分离杜氏盐藻、球等鞭金藻细胞的叶绿体,并提取叶绿体DNA,主要实验步骤和结果如下,其中SDS能瓦解生物膜,氯仿异戊醇不溶于水且密度均大于水,DNA不溶于氯仿异戊醇。请回答:

步骤①收集藻细胞:将两种藻细胞培养液进行预处理后,离心取沉淀物。

步骤②获取叶绿体粗:提物4℃下分别破碎两种藻细胞后,再分别用差速离心法和密度梯度离心法分离获取叶绿体粗提物(原理示意图如下)。

步骤③去除杂质DNA:向步骤②的叶绿体粗提物中加入DNA酶、缓冲液,37℃静置15min后,离心取沉淀物。

步骤④粗提叶绿体DNA:向步骤③获得的叶绿体中加入缓冲液、SDS、蛋白酶K,60℃水浴2h,离心取上清液。再向上清液中加入氯仿异戊醇,在4℃下离心取 ? 

步骤⑤纯化叶绿体DNA:向粗提溶液中加入3mol·L-1醋酸钠及预冷的95%酒精,低温静置1h后,离心弃上清液。加预冷的95%酒精、离心洗涤1~2次,取沉淀物用超纯水溶解。

步骤⑥DNA纯度和浓度:测定利用分光光度法测量并计算叶绿体DNA的纯度及浓度,结果如上右表(表中OD260/OD280值越接近1.8说明DNA越纯)。

(1)步骤①中预处理时应将藻液置于____处24h,以降低叶绿体中淀粉粒的含量,有利于分离得到完整叶绿体。步骤②在利用差速离心法分离获得叶绿体前,需要先在____(填“低于”“等于”或“高于”)4 000r·min-1下离心去除细胞壁、核物质等。

(2)步骤③依据的主要原理是____,去除的“杂质DNA”来源于____

(3)步骤④中离心后应取____。步骤⑤中用95%的冷酒精离心洗涤过程要注意动作轻缓,其目的是____________________________________________________________

(4)根据实验结果分析,____法较适于分离提取叶绿体DNA,原因是_________________________________________

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