题目内容
【题目】图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：
（1）若图2中目的基因D是人的α-抗胰蛋白酶的基因，现在要培养乳汁中含α-抗胰蛋白酶的羊，科学家要将该基因通过___________（方法）注入羊的_______________中，发育完全的母羊有可能分泌含α-抗胰蛋白酶的乳汁。
（2）图2中的目的基因D需要同时使用MestI和PstI才能获得，而图1所示的质粒无限制酶MestI的酶切位点。所以在用该质粒和目的基因构建重组质粒时，需要对质粒进行改造，构建新的限制酶切位点。试帮助完成构建需要的限制酶切位点的过程（提供构建需要的所有条件）：首先用______酶处理质粒；然后用______处理质粒，使被切开的质量末端链接上相应的脱氧核苷酸；再用______ 处理质粒形成限制酶切位点，它可被______识别。（供选答案如下：①EcoRI ②MestI ③PstI ④DNA连接酶 ⑤DNA聚合酶）
（3）假设图1质粒上还有一个PstI的识别序列，现用EcoRI、PstI单独或联合切割同一质粒，得到的DNA长度片段如下表。请在下图中画出质粒上EcoRI和PstI的切割位点。（标出酶切位点之间的长度）
______
【答案】 显微注射法 受精卵 ① ⑤ ④ ② 
【解析】试题分析：分析图1、图2：质粒只有EcoR I酶和Pst I酶的识别位点，外源DNA分子含有Mse I酶、EcoR I酶和Pst I酶识别位点，且切割获得目的基因需要Mse I酶和Pst I酶。
（1）若图2中目的基因D是人的α-抗胰蛋白酶的基因，现在要培养乳汁中含α-抗胰蛋白酶的羊，使用显微注射法注射到羊的受精卵中，则发育成的羊能分泌含α-抗胰蛋白酶的乳汁。
（2）对质粒改造使，需构建新的限制酶酶切位点．首先用①EcoRⅠ处理质粒；然后用⑤DNA聚合酶处理质粒，使被切开的质粒末端连接上相应的脱氧核苷酸；再用④DNA连接酶处理质粒，形成了的限制酶酶切割位点，这样它可被②MetⅠ识别。
（3）图中看出，图中质粒为环状DNA，经限制酶EcoRⅠ单独切割后形成一条链状DNA，说明该酶在质粒上有一个切割位点；而限制酶PstⅠ单独切割，产生了两条链状DNA，说明该酶在质粒上有两个酶切位点，并且两个切点的距离为2.5kb；而两种酶同时切割时产生三个DNA片段，即限制酶PstⅠ的酶切位点在11.5kb的DNA上，故切割位点如图
