“基因靶向”技术，指的是应用DNA同源重组原理，通过一定的载体，用设计好的目的基因替代靶基因，从而达到使靶基因功能丧失的目的。借助这一技术，科学家可以用小鼠进行实验，使其体内的某项特定基因丧失功能，以帮助人们找到治疗疾病的有效方法。下面是该实验的基本过程，请回答有关问题：

(1)获得胚胎干细胞(ES细胞)。实验一般采用ES细胞作为目的基因的受体细胞，这是因为ES细胞具有发育的________。请举出一例获取ES细胞的常用方法： ____________________________________。

(2)获取目的基因。

①目的基因是靶基因的同源片段。经过修饰使靶基因的功能改变或丧失，就可获得目的基因。如果要获得活性降低了的X酶蛋白的目的基因，可以根据此蛋白的结构及功能进行X酶基因的改造，这一技术叫做________。

②为了提高实验成功率，需要通过________技术扩增目的基因，以获得目的基因的大量拷贝。

(3)构建基因表达载体。一个基因表达载体的组成，除了目的——基因以外，还必须有________基因，以便于细胞的筛选。质粒具有的一至多个________位点，使目的基因插人其中成为可能，因此常被选作运载体。

(4)____________________，并从中筛选，然后培育出小鼠。

①由ES细胞培育出小鼠的过程中，需要采用________技术和________技术。

②为了确定该小鼠体内是否成功发生了基因的同源重组，可通过观察小鼠的性状来检测，这属于________水平的鉴定。

小鼠基因敲除技术2007年获诺贝尔奖。80年代初胚胎干细胞的分离和体外培养的成功奠定了基因敲除的技术基础，87年Thompsson首次建立了完整的ESC基因敲除技术的模型，此后几年中基因敲除技术得到了进一步的发展和完善，其技术路线如下。
①胚胎干细胞的获得；
②构建重组基因表达载体；
③用一定方法把重组DNA转入受体细胞内；
④用一定培养基筛选已击中的细胞；
⑤将击中的细胞转入胚胎，通过胚胎移植使其生长为转基因动物，然后对该动物进行形态观察和分子生物学检测。
异源抗体用于人体容易发生排异反应，若将动物抗体分子基因敲除，代之以人的抗体分子基因，那么人源抗体的产生将迎刃而解。根据上述材料回答下列问题：
（1）构建重组载体过程中，为使导人的目的基因能完成表达，需要在目的基因的首端和尾端各插入              ；
（2）上述过程中所需的胚胎通常通过供体获得，再将处理过的胚胎移植到受体内培养，则胚胎移植前要对供体和受体进行              处理，若想培养出多个性状表现一致的个体，可通过              技术；
（3）应用基因敲除技术可让动物生产人源抗体，通常可将从动物体内提取的细胞的抗体分子基因敲除，代之以人的抗体分子基因，然后将该细胞通过细胞融合技术与骨髓瘤细胞融合，再通过              、              等过程筛选出能产生人源抗体的细胞群，再在培养液或小鼠腹腔进行培养，从而获得所需抗体；
（4）用培养基筛选重组载体是否已击中细胞，方法之一是启动子缺失筛选法：原理是在重组载体的目的片段中插入一个启动子缺失的正向选择基因，同时目的基因片段也不包含该基因的启动子序列。若基因载体和细胞基因组发生同源重组，则正向选择基因可以在靶位点基因启动子的作用下得以表达，使阳性细胞具有G418抗性（G418是一种细胞毒性药物，对细胞有抑制或杀伤作用），从而从培养基中得到所需要的阳性克隆细胞，根据上述原理筛选导入成功的细胞的基本方法或过程是              。

小鼠基因敲除技术2007年获诺贝尔奖。80年代初胚胎干细胞的分离和体外培养的成功奠定了基因敲除的技术基础，87年Thompsson首次建立了完整的ESC基因敲除技术的模型，此后几年中基因敲除技术得到了进一步的发展和完善，其技术路线如下。

①胚胎干细胞的获得；

②构建重组基因表达载体；

③用一定方法把重组DNA转入受体细胞内；

④用一定培养基筛选已击中的细胞；

⑤将击中的细胞转入胚胎，通过胚胎移植使其生长为转基因动物，然后对该动物进行形态观察和分子生物学检测。

异源抗体用于人体容易发生排异反应，若将动物抗体分子基因敲除，代之以人的抗体分子基因，那么人源抗体的产生将迎刃而解。根据上述材料回答下列问题：

（1）构建重组载体过程中，为使导人的目的基因能完成表达，需要在目的基因的首端和尾端各插入               ；

（2）上述过程中所需的胚胎通常通过供体获得，再将处理过的胚胎移植到受体内培养，则胚胎移植前要对供体和受体进行               处理，若想培养出多个性状表现一致的个体，可通过               技术；

（3）应用基因敲除技术可让动物生产人源抗体，通常可将从动物体内提取的细胞的抗体分子基因敲除，代之以人的抗体分子基因，然后将该细胞通过细胞融合技术与骨髓瘤细胞融合，再通过               、               等过程筛选出能产生人源抗体的细胞群，再在培养液或小鼠腹腔进行培养，从而获得所需抗体；

（4）用培养基筛选重组载体是否已击中细胞，方法之一是启动子缺失筛选法：原理是在重组载体的目的片段中插入一个启动子缺失的正向选择基因，同时目的基因片段也不包含该基因的启动子序列。若基因载体和细胞基因组发生同源重组，则正向选择基因可以在靶位点基因启动子的作用下得以表达，使阳性细胞具有G418抗性（G418是一种细胞毒性药物，对细胞有抑制或杀伤作用），从而从培养基中得到所需要的阳性克隆细胞，根据上述原理筛选导入成功的细胞的基本方法或过程是               。

小鼠基因敲除技术2007年获诺贝尔奖。80年代初胚胎干细胞的分离和体外培养的成功奠定了基因敲除的技术基础，87年Thompsson首次建立了完整的ESC基因敲除技术的模型，此后几年中基因敲除技术得到了进一步的发展和完善，其技术路线如下。

①胚胎干细胞的获得；

②构建重组基因表达载体；

③用一定方法把重组DNA转入受体细胞内；

④用一定培养基筛选已击中的细胞；

⑤将击中的细胞转入胚胎，通过胚胎移植使其生长为转基因动物，然后对该动物进行形态观察和分子生物学检测。

异源抗体用于人体容易发生排异反应，若将动物抗体分子基因敲除，代之以人的抗体分子基因，那么人源抗体的产生将迎刃而解。根据上述材料回答下列问题：

（1）构建重组载体过程中，为使导人的目的基因能完成表达，需要在目的基因的首端和尾端各插入               ；

（2）上述过程中所需的胚胎通常通过供体获得，再将处理过的胚胎移植到受体内培养，则胚胎移植前要对供体和受体进行               处理，若想培养出多个性状表现一致的个体，可通过               技术；

（3）应用基因敲除技术可让动物生产人源抗体，通常可将从动物体内提取的细胞的抗体分子基因敲除，代之以人的抗体分子基因，然后将该细胞通过细胞融合技术与骨髓瘤细胞融合，再通过               、               等过程筛选出能产生人源抗体的细胞群，再在培养液或小鼠腹腔进行培养，从而获得所需抗体；

（4）用培养基筛选重组载体是否已击中细胞，方法之一是启动子缺失筛选法：原理是在重组载体的目的片段中插入一个启动子缺失的正向选择基因，同时目的基因片段也不包含该基因的启动子序列。若基因载体和细胞基因组发生同源重组，则正向选择基因可以在靶位点基因启动子的作用下得以表达，使阳性细胞具有G418抗性（G418是一种细胞毒性药物，对细胞有抑制或杀伤作用），从而从培养基中得到所需要的阳性克隆细胞，根据上述原理筛选导入成功的细胞的基本方法或过程是               。