【题目】图甲表示含有目的基因DDNA片段长度(bp即碱基对)和部分碱基序列,图乙表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有Msp Ⅰ、 BamH Ⅰ、Mbo Ⅰ、Sma 4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGGG↓GATCC↓GATCCCC↓GGG。请回答下列问题:

1用图甲中的外源DNA(含有目的基因D)和图乙中的质粒构建重组质粒需要使用限制酶和______________________________。前者(酶)的专一性很强,其作用特点是________________________________________

2应该使用限制酶BamH Ⅰ同时处理质粒外源DNA,而不选择其他3种,原因在于(

A.若使用Sma Ⅰ或者Msp I会破坏目的基因。

B.若使用Sma Ⅰ切割质粒,能成功切开质粒得到粘性末端的可能很低。

C.若使用Mbo Ⅰ切割质粒,质粒上会有2处被切开,会将质粒切成两段不利于筛选。

D.使用限制酶BamH Ⅰ能保证目的基因和质粒获得相同的粘性末端,以便目的基因和运载体定向连接,不至于反向连接。

E.使用BamH Ⅰ切割质粒质粒上会有1处被切开,破坏抗生素A抗性基因,保留抗生素B抗性基因,以便于将来筛选含目的基因的受体细胞。

F.只有使用BamH Ⅰ切割,才能保证质粒和目的基因上产生相同的粘性末端。

3若图甲中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换,那么基因D就突变为基因d。从杂合子分离出图甲及其对应的DNA片段,用限制酶Sma Ⅰ完全切割,产物中共有_________种不同DNA片段。若同时用限制酶Msp Ⅰ、Mbo Ⅰ切割图乙中的质粒,则可得到__________DNA片段。

4为了筛选出成功导入含目的基因D的重组质粒的大肠杆菌,一般可进行如下步骤筛选:

第一步:将大肠杆菌在含__________的培养基上,得到如下左图的菌落。

第二步:再将灭菌绒布按到培养基上,使绒布面沾上菌落,然后将绒布按到含__________的培养基上培养,得到如下右图的结果(空圈表示与左图对照无菌落的位置)。

第三步:选出左图培养皿中的某些菌落进行培养,即可得到含重组质粒的大肠杆菌。请在下方左图中圈出含目的基因的重组质粒的大肠杆菌的菌落__________

5以上筛选方式至少需要两步,其实还有其他更简单的操作方法。请阅读下列材料,回答问题:

大肠杆菌pUC118质粒的某限制酶唯酶切序列,位于该质粒的lacZ基因中。lacZ基中如果没有插入外源基因,便可表达出β一半乳糖苷酶。当培养基中含有A物质时,A物质便会被β一半乳糖苷酶水解成蓝色,大肠杆菌将形成蓝色菌落;如果lacZ基因中插入了外源基因,带有pUC118质粒的大肠杆菌便不能表达β一半乳糖苷酶,培养基中的A物质不会被水解成蓝色,大肠杆菌将形成白色菌落。pUC118质粒还携带了氨苄青霉素抗性基因。下图是利用a基因筛选重组质粒示意图。

用下图中的培养基中筛选导入了重组质粒的受体大肠杆菌,制备时除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外还应加入物质应包括(

A.伊红美蓝试剂B.琼脂C.A物质D.氨苄青霉素

6将上述处理后的大肠杆菌置于图中培养基上培养,以检测受体大肠杆菌是否导入重组质粒,结果可能出现蓝色或者白色菌落,其中__________色大肠杆菌菌落即为含重组质粒的目的菌。

 0  168383  168391  168397  168401  168407  168409  168413  168419  168421  168427  168433  168437  168439  168443  168449  168451  168457  168461  168463  168467  168469  168473  168475  168477  168478  168479  168481  168482  168483  168485  168487  168491  168493  168497  168499  168503  168509  168511  168517  168521  168523  168527  168533  168539  168541  168547  168551  168553  168559  168563  168569  168577  170175 

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