Question

4．人组织纤溶酶原激活物（htPA）是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得．流程如下：

（1）htPA基 因可以直接从人体细胞中获取，并通过技术 大量扩增．htPA基因与载体用限制酶切割后，再通过DNA连接（酶）酶连接，以构建重组表达载体．检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用DNA分子杂交（或核酸探针）技术．
（2）为获取更多的卵（母）细 胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其超数排卵．若受精作用发生在体内，则有两道屏障防止多精入卵，其中第一道屏障是透明带反应．
（3）将重组表达载体导 入羊受精卵常用的方法是显微注射法．为了获得转基因母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行性别鉴定．对所获得的胚胎进行胚胎分割可获得多个转基因个体．
（4）若在转htPA基因母羊的羊乳中检测到htPA（或人组织纤溶酶原激活物），说明目的基因成功表达．

Answer 1

分析 DNA重组技术至少需要三种工具：限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶、运载体．
目的基因分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．
该基因工程需要对羊的性别进行选择，由于只有母羊能够分泌乳汁，因此选择母羊的胚胎进行移植．

解答 解：（1）htPA基因可以直接从人体细胞中获取，并通过技术PCR大量扩增．htPA基因与载体用限制酶切割后，再通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体．检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用DNA分子杂交（或核酸探针）技术．
（2）为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其超数排卵．若受精作用发生在体内，则有两道屏障防止多精入卵，其中第一道屏障是透明带反应，第二道屏障为卵黄膜的封闭作用．
（3）将重组表达载体导入羊受精卵常用的方法是显微注射法．为了获得转基因母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行性别鉴定．对所获得的胚胎进行胚胎分割可获得多个转基因个体．
（4）若在转htPA基因母羊的羊乳中检测到htPA（或人组织纤溶酶原激活物），说明目的基因成功表达．
故答案为：
（1）PCR       DNA连接（酶）  DNA分子杂交（或核酸探针）
（2）超数排卵   透明带反应
（3）显微注射法   性别鉴定    胚胎分割
（4）htPA（或人组织纤溶酶原激活物）

点评 本题考查了基因工程和胚胎工程的相关知识，要求考生能够识记基因工程的操作步骤；明确该基因工程中需要选择母羊进行胚胎移植；要求考生具有扎实的基础知识，难度适中，属于考纲中识记、理解层次的考查．