Question

12．【加试题】下列文题有关大肠杆菌的培养实验，请回答：

（1）配制培养大肠杆菌的培养基时，根据“细菌喜荤，霉菌喜素”的规律，通常在培养基中加入蛋白胨和酵母提取物作为营养物质，为维持一定的滲透压，常需加入一定量的NaCl．
（2）大肠杆菌培养和分离的实验中，在LB液体培养基中进行扩大培养，培养液经稀释后，在LB固体培养基上进行分离，并将培养皿倒置放在恒温培养箱中培养，可以获得如图效果． 为了检测接种、培养过程是否受杂菌污染以及无菌操作是否规范，应同时将未接种的培养基放入恒温培养箱培养．
（3）通常对获得的纯菌种可以依据菌落的形状、大小等特征进行初步的鉴定．
（4）关于“大肠杆菌培养和分离”的操作中，下列叙述正确的是D
A．高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖
B．倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上
C．为了防止污染，接种工具精火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落
D．用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上
（5）科学家利用转基因技术，利用大肠杆菌生产胰岛素，其过程如图2．由甲和载体乙拼接形成的丙通常称为重组质粒，构建得到丙时必需的工具酶有限制性核酸内切酶和DNA连接酶．在此过程中，用来处理丁以增加细胞壁通透性的化学试剂是B
A．氯化钠    B．氯化钙     C．次氯酸钠     D．纤维素酶．

Answer 1

分析 1、无菌操作，包括灭菌和消毒两种方式，消毒的方法有巴氏消毒法、酒精消毒、煮沸消毒法；灭菌的方法有干热灭菌、灼烧灭菌和高压蒸汽灭菌；
2、微生物的接种：微生物接种的方法很多，最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，常用来统计样品活菌数目的方法是稀释涂布平板法．
3、平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面．
4、分析图2：甲是外源DNA分子，乙是质粒，丙是重组质粒，丁是受体细胞．

解答 解：（1）配制培养大肠杆菌的培养基时，根据“细菌喜荤，霉菌喜素”的规律，通常在培养基中加入蛋白胨和酵母提取物作为营养物质，为维持一定的滲透压，常需加入一定量的NaCl．
（2）大肠杆菌培养和分离的实验中，在 LB液体培养基中进行扩大培养，培养液经稀释后，在LB固体培养基上进行分离，并将培养皿倒置放在恒温培养箱中培养，可以获得如图效果．为了检测接种、培养过程是否受杂菌污染以及无菌操作是否规范，应同时将未接种的培养基放入恒温培养箱培养．
（3）通常对获得的纯菌种可以依据菌落的形状、大小等特征进行初步的鉴定．
（4）A、高压灭菌加热结束，等待压力表指针回到零后，才能开启锅盖，不能打开放气阀使压力表指针回到零，A错误；
B、倒平板过程中不能打开培养皿的皿盖，B错误；
C、接种环火焰上灼烧后，待冷却后才可以快速挑取菌落，C错误；
D、用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上，D正确．
故选：D．
（5）由甲和载体乙拼接形成的丙通常称为重组质粒；构建基因表达载体时，需先用限制酶切割外源DNA分子和运载体，其次还需要用DNA连接酶将目的基因与运载体连接形成重组DNA分子；将目的基因导入微生物细胞时常用感受态转化法，即用氯化钙来处理微生物细胞，以增加细胞壁通透性，使之成为感受态细胞．
故答案为：
（1）酵母提取物NaCl      
（2）LB液体培养基    稀释   土不分离   倒置    无菌操作是否规范
（3）菌落     
（4）D
（5）重组质粒   限制性核酸内切酶和DNA连接酶      B

点评 本题图解，考查微生物的分离和培养、基因工程，要求考生识记接种微生物常用的两种方法；识记培养基的成分、种类及功能；识记基因工程的概念、原理及操作步骤等，能结合图中信息准确答题．