Question

克隆猪成功率较低，与早期胚胎细胞的异常凋亡有关．Bcl2基因是细胞凋亡抑制基因，用PCR技术可以检测该基因转录水平，进而了解该基因与不同胚胎时期细胞凋亡的关系．克隆猪的培育及该基因转录水平检测流程如图一．请回答：
（1）图中重组细胞的细胞核来自

 

细胞，早期胚胎移入受体子宫后继续发育，经桑椹胚、囊胚和

 

胚最终发育为克隆猪．该过程的原理是

 

．
（2）在PCR过程中可检测出cDNA中Bcl2 cDNA的分子数，进而计算总mRNA中Bcl2 mRNA的分子数，从而反映出Bcl2基因的转录水平．
①图中X表示

 

过程．
②从基因组数据库中查询Bcl2 mRNA的核苷酸序列，以便根据这一序列设计合成

 

用于PCR扩增，PCR扩增过程需要

 

 酶．
（3）常用基因拼接技术研究猪的遗传．图二的酶M和酶N是两种限制酶，图中DNA片段只注明了黏性末端处的碱基种类，其它碱基的种类未作注明．

①酶M特异性剪切的DNA片段是 ，则酶N特异性剪切的DNA片段是

 

．
②多个片段乙和多个片段丁混合在一起，用

 

酶拼接得到环状DNA，其中只由两个DNA片段连接成的环状DNA分子有

 

种．

Answer 1

考点：动物细胞核移植技术,基因工程的原理及技术

专题：

分析：1、X指有RNA生成DNA，表示逆转录；PCR扩增技术中反体系中应需要引物、TaqDNA聚合酶、模板DNA、缓冲液、脱氧核苷酸、水等，扩增第一轮循环的模板是Bcl-2 cDNA，需要的酶是cDNA热稳定DNA聚合酶．
2、限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂．

解答： 解：（1）核移植中，提供细胞核是体细胞，早期胚胎移入受体子宫后继续发育，经桑椹胚、囊胚和原肠胚最终发育为克隆猪．该过程的原理是动物细胞核的全能性．
（2）①X指有RNA生成DNA，表示逆转录．
②PCR扩增技术中反体系中应需要引物、TaqDNA聚合酶、模板DNA、缓冲液、脱氧核苷酸、水等，需要的酶是cDNA热稳定DNA聚合酶．
（3）根据图二粘性末端可知酶M和酶N识别的片段可能是或，由题干已知酶M特异性剪切的DNA片段是，所以酶N特异性剪切的DNA片段是． 将多个片段乙和多个片段丁混合在一起，用DNA连接酶拼接得到环状DNA，其中只由两个DNA片段连接成的环状DNA分子有3种情况，分别是乙与丁相连，乙与乙相连，丁与丁相连． 
故答案为：
（1）体   原肠   动物细胞核的全能性
（2）①逆转录   
②引物   Taq或“热稳定的DNA聚合”或“耐高温的DNA聚合”
（3）①         
②DNA连接酶        3

点评：本题考查基因工程、动物细胞工程、PCR技术等相关知识，理解限制酶的作用特点是解题的关键，同时要求学生具备分析图形的能力．