题目内容
逆转录病毒载体是一种表达型质粒，结构如图所示。图上的“逆转录病毒序 ”可以整合到动物细胞的染色体上，不断地表达其携带的目的基因，获得大量重 组逆转录病赛。（E、F、H分别为限制酶 E、F、H的酶切位点）。
(1) 逆转录的模板是_____,原料是_____。
(2) 在构建重组质粒时，目的基因插入该质粒，此过程需要的酶是限制酶____和____。
(3) 将重组质粒转人大肠杆菌前用某种离子处理大肠杆菌使之成为_______才能完成转化过程。为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加_______的培养基进行培养。
(4) 获取大量重组质粒后,可培育转基因小鼠，将重组质粒转入导人小鼠原核期受精卵的方法是_______。若目的基因进人细胞后插入在一条染色体DNA上，那么获得转基因纯合子小鼠的方法是______________。
（1）RNA（1分） （四种）脱氧核苷酸
（2）F DNA 连接酶
（3）感受态细胞 抗生素A
（4） 显微注射（法） 转基因小鼠间相互交配（或杂交）
解析试题分析：（1）逆转录是以RNA为模板合成DNA的过程，所需不要的模板为RNA，原料为四种脱氧核苷酸。（2）用到的限制酶不能破坏标记基因（抗生素A抗性基因），且应该整合到“逆转录病毒序列”上。（3）抗生素A抗性基因为标记基因，用来帮助筛选目的基因。（4）目的基因进人细胞后插入在一条染色体DNA上，对应的同源染色体上无对应的等位基因；让转基因小鼠相互交配，就能获得转基因纯合子小鼠。
考点：本题考查基因工程的有关知识，意在考查考生理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力。
（每空1分，共6分）加酶洗衣粉是指含有酶制剂的洗衣粉。请回答下列问题：
（1）由下图推知，该实验的目的是 。50℃时加酶洗衣粉中碱性蛋白酶的最适含量约是________%。
（2）下表是添加脂肪酶的加酶洗衣粉和普通洗衣粉洗涤效果的实验记录，请据表回答问题：
| 脸盆编号 | 洗涤物 (等量) | 洗涤温度 | 洗衣粉(等量) | 水量 | 洗净所需时间 |
| 1 | 油污布 | 45℃ | 加酶 | 2L | 4min |
| 2 | 油污布 | 45℃ | 普通 | 2L | 7min |
| 3 | 油污布 | 5℃ | 加酶 | 2L | 9min |
| 4 | 油污布 | 5℃ | 普通 | 2L | 8min |
②若1号实验组洗净油污布所需时间接近7min，最可能的原因是 。
（3）下列衣料不适宜用添加蛋白酶的加酶洗衣粉洗涤的有______________________。
①棉织品 ②毛织品 ③腈纶织品 ④蚕丝织品
（4）根据以上实验结果，请写出两项提高加酶洗衣粉洗涤效果的措施_________________________________________________________。
下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（ampr为抗氨苄青霉素基因），其中①。④表示相关的操作步骤，甲、乙表示相关结构或细胞。Pst I酶和Sma I酶切割基因后将产生不同的粘性末端。据图分析下列说法错误的是
| A．图中甲代表的是基因表达载体，乙可代表番茄细胞 |
| B．可用Pst I酶和Sma I酶切割鱼的抗冻蛋白基因以避免目的基因末端发生任意连接 |
| C．若用Pst I酶和Sma I酶切割质粒产生的DNA片段有3种 |
| D．图中③、④依次表示组织培养过程中番茄组织细胞的脱分化和再分化过程 |
某兴趣小组进行了如下实验：
【实验目的】比较甲、乙、丙三种微生物所产生的淀粉酶的活性
【实验原理】略。
【实验材料】三种微生物淀粉酶提取液（提取液中酶蛋白浓度相同）等
【实验步骤】
a．取四支试管，分别编号；
b．按下表内要求进行操作；
| | 试管1 | 试管2 | 试管3 | 试管4 |
| 蒸馏水 | 2 | 3 | 2 | A______ |
| pH=8缓冲液 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
| 淀粉溶液 | 1 | 1 | 1 | 1 |
| 甲生物提取液 | 0.3 | | | |
| 乙生物提取液 | | 0.3 | | |
| 丙生物提取液 | | | 0.3 | |
| 总体积 | 3.8 | 3.8 | 3.8 | B |
d．在上述四支试管冷却后滴入碘液；
e．观察比较实验组的三支试管与对照组试管的颜色及其深浅；
【实验结果】（注：“+”显色，“++”显色更深；“-”不显色）
| | 试管1 | 试管2 | 试管3 | 试管4 |
| 颜色深浅程 | ++ | - | + | C______ |
(1)表中A的数值为________，C的颜色深浅程度____（用“+”或“-”表示）。
(2)该实验的自变量是________，无关变量有___________（写出2种即可）。
(3)除了用碘液检验淀粉的剩余量来判断实验结果外，还可以用____试剂来检测生成物的量。若用该试剂检验，颜色变化最深的试管是________________________。
(4)根据上述结果得出的结论是：不同来源的淀粉酶，虽然酶蛋白浓度相同，但活性不同。造成实验中三种酶活性差异的根本原因是______________________________。
(5)同学们还做了反应速率与底物浓度关系的实验。右上坐标中已根据实验结果画出3号试管中酶活性的曲线，请你在坐标中画出2号试管中酶活性的曲线_______________。
海洋中的发光细菌具独特的生理特性，可作为环境监测的指标生物。
I.（1）使用 法（答二种），可在固体培养基上获得单菌落，纯化发光菌株。
（2）细菌这类微生物在基因工程中有重要应用，试列举其中一项。
II．现利用发光细菌对海水重金属污染程度进行生物毒性监测，请完善下列实验设计并回答问题：
实验原理：细菌代谢正常时，发光强度稳定；当重金属影响到其代谢时，发光会受到抑制，抑制程度用抑光率（发光被抑制的百分率）表示。
实验材料：发光菌悬液、可能受重金属污染的待测海水水样、3%NaCl溶液、荧光分光光度计（用于测定细菌发光强度）、试管等。
（1）实验步骤：按下表配制待测海水样品稀释液。
| 组 别 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 3%NaCl溶（mL） | | 4.74 | 4.49 | 4.24 | 3.99 |
| 海水样品（mL） | | 0.25 | 0.50 | 0.75 | 1.00 |
| 发光菌悬液（mL） | | 0.01 | 0.01 | 0.01 | 0.01 |
| 混合液中海水浓度（%） | | 0.05 | 0.10 | 0.15 | 0.20 |
①1号试管中应加入：3％NaCl溶液、海水样品、发光菌悬液分别为 mL（3分）。
②各试管静置15min后， 。
（2）计算相对抑光率：按照公式T％= 计算各组相对抑光率。
（3）如果测得上述各组相对抑光率如下：
| 组别 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 相对抑光率（%） | 0 | 6 | 13 | 17 | 23 |
②根据结果可以判断待测海水样品 。
