Question

19．胰岛B细胞移植是一种有效治疗糖尿病的方法．利用小鼠再生胰腺提取物（RPE）可定向诱导人
羊膜间充质干细胞（hAMSCs）分化成胰岛B细胞．回答问题：
（1）取人羊膜组织刮除血块的上皮细胞，冲洗后剪碎，然后用胰蛋白酶处理，最终制成hAMSCs悬液，将细胞悬液放入培养瓶中进行原代培养，当细胞帖壁生长到一定阶段时，出现接触抑制现象，此时细胞停止分裂增殖，这时需要将细胞进行相关处理，然后进行传代培养．
（2）取传至第3带的hAMSCs放入细胞培养板，同时加入RPE进行诱导分化培养．该代hAMSCs能保持细胞正常的核型．诱导分化培养15天后，提取细胞mRNA，用胰岛素基因探针进行分子杂交，可初步检测hAMSCs是否分化成胰岛B细胞．
（3）hAMSCs细胞在RPE作用下，可以定向分化形成具有正常胰岛B细胞功能的细胞，其根本原因是基因选择性表达．培养hAMSCs细胞的培养液中营养成分包括糖、氨基酸、无机盐、血清（至少写两种）
（4）人体器官移植面临的主要问题有供体器官短缺和免疫排斥，目前临床通过使用免疫抑制剂抑制T细胞的增殖来提高器官移植的成活率．

Answer 1

分析 1、动物细胞培养的过程：取动物组织块→剪碎组织→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养液中（原代培养）→放入二氧化碳培养箱培养→贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液→转入培养液（传代培养）→放入二氧化碳培养箱培养．
2、胚胎干细胞的主要用途是：
①可用于研究哺乳动物个体发生和发育规律；
②是在体外条件下研究细胞分化的理想材料．ES细胞在饲养层细胞上或在添加抑制因子的培养液中，能够维持不分化的状态．在培养液中加入分化诱导因子，如牛黄酸、丁酰环腺苷酸等化学物质时，就可以诱导ES细胞向分化，这为揭示细胞分化和细胞凋亡机理提供了有效的手段；
③可以用于治疗人类的某些顽疾，如帕金森综合症、糖尿病、老年痴呆症、肝衰竭、新衰竭、成骨不良；
④培育各种组织器官，用于器官移植，解决供体器官不足和器官移植后免疫排斥的问题．

解答 解：（1）取人羊膜组织刮除血块、上皮细胞，冲洗后剪碎，然后用胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）处理，最终制成hAMSCs悬液．将细胞悬液放人培养瓶中进行原代培养，当细胞贴壁生长到一定阶段时，出现接触抑制现象，此时细胞停止分裂增殖，这时需要将细胞进行相关处理，然后进行传代培养．
（2）10代以内的细胞可以保持正常的二倍体核型，因此传至第 3 代的hAMSCs能保持细正常的（二倍体）核型．细胞分化的实质是基因的选择性表达，因此要检测 hAMSCs 是否分化成胰岛 B 细胞，在诱导分化培养15天后，可提取细胞的RNA（或mRNA），用胰岛素基因探针进行分子杂交．
（3）hAMSCs细胞在RPE作用下，可以定向分化形成具有正常胰岛B细胞功能的细胞，其根本原因是基因选择性表达．培养hAMSCs细胞的培养液中营养成分包括糖、氨基酸、无机盐、血清．
（4）人体器官移植面临的主要问题有供体器官短缺和免疫排斥，目前临床通过使用免疫抑制剂抑制T细胞的增殖来提高器官移植的成活率．
故答案为：
（1）胰蛋白酶      接触抑制
（2）核型     mRNA
（3）基因选择性表达        糖、氨基酸、无机盐、血清
（4）免疫抑制剂

点评 本题考查动物细胞培养、胚胎干细胞的研究与应用等知识，意在考查考生的识记能力和理解所学知识要点，把握知识间内在联系，形成知识网络结构的能力；能运用所学知识，准确判断问题的能力，属于考纲识记和理解层次的考查．