Question

9．如表是几种限制酶识别序列及其切割位点，如图中标注了在某质粒及某DNA片段上相关限制酶的酶切位点，请回答下列问题：

限制酶	BamHⅠ	BcIⅠ	Sau3AⅠ	HindⅢ
识别序列及切 割位点	↓ GGATCC CCTAGG ↑	↓ TGATCA ACTAGT ↑	↓ GATC CTAG ↑	↓ AAGCTT TTCGAA ↑

（1）根据表中信息，Sau3AⅠ在该质粒上有3个酶切位点．在将图中质粒和目的基因构建成重组质粒进程中，应从表中选用的两种限制酶是BclⅠ和HindⅢ．
（2）若将BamHⅠ酶切的DNA末端与BcIⅠ酶切的DNA末端连接，对于该连接部位B
A．BamHⅠ酶和BcIⅠ酶都能切开         B．BamHⅠ酶和BcIⅠ酶都不能切开
C．BamHⅠ酶能切开，BcIⅠ酶不能切      D．BamHⅠ酶不能切开，BcIⅠ酶能切开
（3）酶切后的载体和目的基因片段，通过DNA连接酶作用后可形成重组质粒．若将该重组质粒导入大肠杆菌需用氯化钙处理大肠杆菌，为了筛选出含有重组质粒的大肠杆菌，应在培养基中添加四环素．

Answer 1

分析 解答本题的关键在于理解重组质粒中标记基因的作用．选择限制酶需注意插入目的基因时不能破坏标记基因．
根据题意和图示分析可知：在质粒上存在BamH I、BclⅠ、BamH I和HindⅢ等四个酶切位点，其中BamH I的切割位点在两个抗性基因上都有，而抗性基因为载体的标记基因，因此不可用该酶切割．在目的基因上，BclⅠ、BamH I、HindⅢ和Sau3AⅠ四种酶也存在酶切位点．

解答 解：（1）由于BclⅠ和HindⅢ识别序列都包含了Sau3AⅠ识别序列，所以Sau3A I在质粒上有三个酶切位点．由于BamHⅠ和Sau3A I会破坏质粒中的两个抗性基因，不利于后期的筛选，所以应选用限制酶为BclⅠ和HindⅢ．
（2）BamHⅠ的识别序列为$\frac{\underline{\;GGATCC\;}}{CCTAGG}$，BclⅠ酶的识别序列为$\frac{\underline{\;TGATCA\;}}{ACTAGT}$，两种酶切割后被DNA连接酶连接，碱基序列为$\frac{\underline{\;GGATCA\;}}{CCTAGT}$，不满足这两种限制酶对识别序列的特异性要求，所以不能再被这两种限制酶切割．
（3）酶切后的载体和目的基因片段，通过DNA连接酶作用后可形成重组质粒．若将该重组质粒导入大肠杆菌需用氯化钙处理大肠杆菌，使之变为感受态．为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加四环素．
故答案为：
（1）3   BclⅠ和 HindⅢ
（2）B 
（3）DNA连接    氯化钙   四环素

点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，掌握各操作步骤的相关细节，能结合所学的知识准确答题，属于考纲应用和理解层次的考查．