Question

16．基因工程制药是制药行业的一支新军，不仅具有独特的优势，发展速度也很快，如图是应用基因工程构建疱疹病毒亚单位疫苗的方法，请根据图示回答下列问题：

（1）提取单纯疱疹病毒DNA后用限制酶切取外壳蛋白基因作为目的基因，获取目的基因后，要用PCR技术对其进行扩增．
（2）首先，要已知目的基因的一段核苷酸序列，以便人工合成引物．将过量的引物与目的基因混合，加热到90-95℃，使双链DNA解旋成单链，之后冷却到55-60℃，引物与DNA单链结合，下一步，加入Taq酶和4种脱氧核苷酸，升高温度至70-75℃后，完成互补链的合成，如此重复循环多次，直到产生足够供实验用的目的基因．
（3）提取并剪切牛痘DNA，使其与目的基因连接成重组DNA后，在活细胞中培养一段时间后，分离出无害的病毒（疫苗），它含有与单纯疱疹病毒相同的外壳．
（4）将分离出的疫苗注射到人体内，激活人体的体液免疫，产生抗体和记忆细胞．

Answer 1

分析 PCR技术：
1、概念：PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术．
2、原理：DNA复制．
3、前提条件：要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一对引物．
4、条件：模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶）
5、过程：①高温变性：DNA解旋过程（PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶，高温条件下氢键可自动解开）；低温复性：引物结合到互补链DNA上；③中温延伸：合成子链．

解答 解：（1）从疱疹病毒DNA上获取外壳蛋白基因作为目的基因时，需要用限制酶；PCR技术可在体外扩增目的基因．
（2）利用PCR技术扩增目的基因时，需要已知目的基因的一段核苷酸序列，以便人工合成引物．将过量的引物与目的基因混合，加热到90-95℃，使双链DNA解旋成单链，之后冷却到55-60℃，引物与DNA单链结合，下一步，加入Taq酶和4种脱氧核苷酸，升高温度至70-75℃后，完成互补链的合成，如此重复循环多次，直到产生足够供实验用的目的基因．
（3）提取并剪切牛痘DNA，使其与目的基因连接成重组DNA后，需要导入受体细胞（活细胞）中培养一段时间后，分离出无害的病毒（疫苗），它含有与单纯疱疹病毒相同的外壳．
（4）抗体是体液免疫产生的．
故答案为：
（1）限制      外壳蛋白     PCR技术
（2）一段核苷酸序列     90-95     Taq酶
（3）活细胞     单纯疱疹病毒
（4）体液

点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节，了解基因工程技术的相关应用，能结合所学的知识准确答题．