Question

如图为利用农杆菌培育转基因植物的流程图，图中①②③④⑤标示相关操作过程，请据图回答：

（1）完成①②过程需要使用

 

，③过程需要利用

 

，上述两种工具的作用部位均为

 

．
（2）④过程需用

 

处理农杆菌，其目的是

 

，图中将目的基因导人受体细胞所用的方法是

 

．
（3）含有目的基因的受体细胞，需经

 

和

 

过程才能发育成植株，该过程需要在

 

条件下进行．
（4）若利用植物细胞融合的方式来获取特定的受体细胞以获取转基因杂交种，首先需用

 

处理细胞，获得有活力的原生质体，然后利用

 

（试剂）诱导原生质体融合，杂种细胞制备成功的标志是

 

．

Answer 1

考点：基因工程的原理及技术,植物培养的条件及过程,植物体细胞杂交的过程

专题：

分析：农杆菌转化法的具体过程：
（1）利用土壤的Ti质粒构建基因表达载体，即将目的基因整合到土壤农杆菌的Ti质粒上．
（2）将整合了目的基因的Ti质粒导入土壤农杆菌细胞内．
（3）利用土壤农杆菌感染植物细胞，该过程实际上是将含有目的基因的土壤农杆菌Ti质粒导入植物细胞内．
（4）含有目的基因的土壤农杆菌Ti质粒进入植物细胞后，可以把自己的一段基因整合到细胞核中的染色体上，这段基因中包含了目的基因．
原理：农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上．根据农杆菌的这一特点，如果将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上，通过农杆菌的转化作用，就可以把目的基因整合到植物细胞中染色体的DNA上．

解答： 解：（1）完成①②即切割质粒和含有目的基因的DNA分子过程需要使用限制酶，③将目的基因和运载体连接形成重组DNA分子过程需要利用DNA连接酶；限制酶和DNA连接酶的作用部位均为磷酸二酯键．
（2）将目的基因导入微生物细胞时，需要用Ca²⁺处理微生物细胞，使其成为易于吸收周围环境中DNA分子的感受态；图中将目的基因导人受体细胞所用的方法是农杆菌转化法．
（3）将含有目的基因的受体细胞培育成转基因植株，还需要采用植物组织培养技术，该技术包括脱分化和再分化两个过程；植物组织培养过程需要在无菌条件下进行．
（4）进行植物细胞融合时，需要用纤维素酶和果胶酶处理植物细胞以去除细胞壁获得原生质体；诱导植物原生质体融合时常有聚乙二醇（PEG）；受体细胞制备成功的标志是再生出新的细胞壁．
故答案为：
（1）限制性核酸内切酶（或限制酶）        DNA连接酶                     磷酸二酯键
（2）Ca²⁺       使细胞处于（一种能吸收周围环境中DNA分子的）感受态       农杆菌转化法
（3）脱分化                             再分化                          无菌
（4）纤维素酶和果胶酶             聚乙二醇（或PEG）                  再生出新的细胞壁

点评：本题结合利用农杆菌培育转基因植物的流程图，考查基因工程和植物细胞工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤；识记植物组织培养和植物体细胞杂交的具体过程，能结合所学的知识准确答题．