题目内容
【题目】下图为科研工作者利用小鼠制备H7N9禽流感病毒单克隆抗体的过程。请据图回答有关问题。
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(1)诱导X细胞和Y细胞融合可采用化学试剂_________、辅助________________等物理方法、还可用__________________诱导其融合。
(2)在杂种细胞的培养过程中,为了防止污染,通常还要在细胞培养液中添加一定量的________,其培养液与植物组织培养的培养基相比,特有的天然成分________。
(3)单克隆抗体的制备过程需要经过多次筛选,首先用特定的选择性培养基筛选出_________,还需进行________________和专一抗体检测,最终获得足够数量的________________的细胞,选出符合要求的细胞后,可在体外条件下培养或注射到小鼠的腹腔内进行增殖。
(4)利用上述技术生产的单克隆抗体可制作成诊断盒,用于准确、快速诊断H7N9禽流感病毒的感染者,这种诊断运用了____________杂交技术,这体现了单克隆抗体______________的特性。
【答案】聚乙二醇(PEG) 离心震动电刺激 灭活的病毒 抗生素 动物血清(或动物血浆) 杂交瘤细胞 克隆化培养 能分泌所需(特异性/专一性)抗体的 抗原—抗体 理化性质单一、与抗原结合的特异性强
【解析】
细胞融合为在自然条件下或用人工方法(生物的、物理的、化学的)使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的过程。图中X细胞一般选用骨髓瘤细胞,原因是其具有无限增殖的能力。
(1)诱导X细胞和Y细胞融合可采用化学试剂聚乙二醇(PEG)、辅助离心震动电刺激等物理方法、还可用灭活的病毒诱导其融合。
(2)在杂种细胞的培养过程中,通常还要在细胞培养液中添加一定量的抗生素,防止细菌污染。其培养液与植物组织培养的培养基相比,特有的天然成分动物血清(或动物血浆)。
(3)单克隆抗体的制备过程需要经过多次筛选,首先用特定的选择性培养基(HAT培养基)筛选出杂交瘤细胞,该培养基上B细胞和B细胞融合细胞、瘤细胞和瘤细胞融合细胞不能生长。还需进行克隆化培养和专一抗体检测(使用特定的抗原决定簇进行检测),最终获得足够数量的能分泌所需(特异性/专一性)抗体的细胞,选出符合要求的细胞后,可在体外条件下培养或注射到小鼠的腹腔内进行增殖。
(4)单克隆抗体能与抗原特异性结合,利用上述技术生产的单克隆抗体可制作成诊断盒,用于准确、快速诊断H7N9禽流感病毒的感染者,这种诊断运用了抗原—抗体杂交技术,这体现了单克隆抗体理化性质单一、与抗原结合的特异性强的特性。
【题目】图 1 是某基因工程中构建重组质粒的过程示意图,载体 质粒 P0 具有四环素 抗性基因(tetr)和氨苄青霉素抗性基因(ampr)。请回答下列问题:
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(1)EcoR V 酶切位点为
,EcoR V 酶切出来的线性载体 P1 为__________未端。
(2)用 Taq DNA 聚合酶进行 PCR 扩增获得的目的基因片段,其两端各自带有一个腺 嘌呤脱氧核苷酸。载体 P1 用酶处理,在两端各添加了一个碱基为___________ 的 脱氧核苷酸,形成 P2;P2 和目的基因片段在__________酶作用下,形成重组质 粒 P3。
(3)为筛选出含有重组质粒 P3 的菌落,采用含有不同抗生素的平板进行筛选,得到 A、B、C 三类菌落,其生长情况如下表(“+”代表生长,“﹣”代表不生长)。根据表 中结果判断,应选择的菌落是_____(填表中字母)类,另外两类菌落质粒导入情况分别是_____、___________________。
菌落类型 平板类型 | A | B | C |
无抗生素 | ﹢ | ﹢ | ﹢ |
氨苄青霉素 | ﹢ | ﹢ | ﹣ |
四环素 | ﹢ | ﹣ | ﹣ |
氨苄青霉素+四环素 | ﹢ | ﹣ | ﹣ |
(4)为鉴定筛选出的菌落中是否含有正确插入目的基因的重组质粒,拟设计引物进行 PCR 鉴定。图 2 所示为甲、乙、丙 3 条引物在正确重组质粒中的相应位置,PCR 鉴定时应选择的一对引物是____________。某学生尝试用图中另外一对引物从某一 菌落的质粒中扩增出了 400 bp 片段,原因是_______________。
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