Question

【题目】地沟油最大的来源为城市饭店下水道的隔油池，用脂肪酶处理地沟油具有广泛的应用前景。为获得高产脂肪酶的菌株，并将其应用于含地沟油的污水处理，某研究小组进行了一些实验。请回答下列问题：

（1）欲分离筛选出能分泌脂肪酶的细菌，应配制以脂肪为____________的固体培养基，这种培养基从功能上看属于____________培养基。

（2）经过稀释，在平板上加入0．1mL稀释液并涂布，经适当时间培养后，在平板上计数菌落，据此可计算出每毫升培养液中的活菌数。这种计数方法得到的结果一般比实际值偏小，其原因可能有____________、____________。

（3）经上述实验得到如下表所示的结果：

稀释倍数	101	102	103	104	105	106
培养 结果
计数 （平均值）	难以计数	难以计数	难以计数	159	17	2

为保证结果准确，一般选择表中的稀释倍数为____________的平板进行统计。某同学认为“稀释操作时，可以将1mL培养液加适量无菌水直接稀释至所选择的稀释倍数，这样可以简化步骤，省去梯度稀释的麻烦。”该同学的说法是否合理?请判断并说明理由：_____________________。

Answer 1

【答案】唯一碳源 选择 有的菌落是由2个或2个以上细菌形成的 涂布器上还残留少量细菌 104 不合理，在做梯度稀释之前不能确定这个稀释倍数的每个平板的菌落是否在30~300之间

【解析】

1、培养基按功能分：

种类	制备方法	特征	用途
选择培养基	培养基中加入某种化学成分	根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛选率	加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌
鉴别培养基	加入某种试剂或化学药品	依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计	鉴别和区分菌落相似的微生物伊红和美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌

2、微生物常见的接种的方法

①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。

②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

（1）欲分离筛选出能分泌脂肪酶的细菌，应配制以脂肪为唯一碳源的培养基；由于只要能分解脂肪的微生物能在这种培养基上生存，因此从功能上看，其属于选择培养基。

（2）采用稀释涂布平板法得到的结果一般比实际值偏小，原因可能有有的菌落是由2个以上的细菌形成的、涂布器上还残留少量细菌。

（3）根据表中培养结果可知，稀释倍数为104时，培养基中菌落彼此分散，能通过肉眼进行计数，且数目在30-300之间，因此为保证结果准确，一般选择104稀释倍数的平板进行统计。由于在做梯度稀释之前不能确定这个稀释倍数的每个平板的菌落是否在30～300之间，因此这种方法不合理。