Question

【题目】柯斯质粒是一种人工建构含有λ噬菌体DNA的cos位点（指互补的黏性末端结合形成的双链DNA区域）和质粒复制子（ori）的新型载体，它同时兼具两者特性，长度一般为5﹣7kb．λ噬菌体的末端酶能识别并切割两端由cos位点包围着的噬菌体基因组长度（38﹣52kb）的DNA片段，凡具有cos位点的任何DNA分子只要在长度上相当于噬菌体的基因组，就可以被识别并包装成类似噬菌体感染大肠杆菌．图1为应用柯斯质粒进行某一真核基因克隆的方案图，图2为不同的限制酶及相应的切割位点．请据图分析回答：
（1）柯斯质粒可以作为基因工程载体的理由是具备、和启动子、终止子等．
（2）如图1所示柯斯克隆方案，宜采用酶对真核基因进行酶切，采用酶对柯斯质粒进行酶切，经连接后图中（填a或b）将会被重新包装进入λ噬菌体；柯斯质粒作为载体可携带的真核基因长度范围为 ．
（3）检测是否成功实现转化的实验思路是：将新包装的类似噬菌体去感染大肠杆菌，后者能够在含的培养基上生长即为转化成功．
（4）从图中信息可知上述柯斯克隆方案存在的缺点是 ．

Answer 1

【答案】
（1）标记基因；多种限制酶切割位点
（2）Sau3A、Hind III；BamHI、Hind III；b；31﹣47kb
（3）氨苄青霉素
（4）经限制酶切割作用产生的柯斯质粒载体、真核基因自身也会连接形成多聚体分子
【解析】解：（1）由图可知，柯斯质粒可以作为基因工程载体的理由是具备标记基因（氨苄青霉素抗性基因）、多种限制酶切割位点（具有限制酶EcoRI、PstI、BamHI、Hind III 的切割稳定）和启动子、终止子等．（2）不宜用限制酶PstI切割，因为该酶切割会破坏标记基因（氨苄青霉素抗性基因）；不宜用限制酶EcoRI切割，因为该酶切割会破坏目的基因；由于限制酶BamHI的识别序列中含有限制酶Sau3A的识别序列，因此为了防止目的基因与运载体反向连接，宜采用 Sau3A、Hind III酶对真核基因进行酶切，采用BamHI、Hind III 酶对柯斯质粒进行酶切；由于a只有一端有cos位点，而b的两端都有cos位点，因此经连接后图中b将会被重新包装进入λ噬菌体；柯斯质粒长度一般为5﹣7kb，λ噬菌体基因组长度为（38﹣52kb），凡具有cos位点的任何DNA分子只要在长度上相当于噬菌体的基因组，就可以被识别并包装成类似噬菌体感染大肠杆菌，因此柯斯质粒作为载体可携带的真核基因长度范围为（38﹣7）～（52﹣5），即31﹣47kb．（3）由图可知，标记基因是氨苄青霉素抗性基因，因此检测是否成功实现转化的实验思路是：将新包装的类似噬菌体去感染大肠杆菌，后者能够在含氨苄青霉素的培养基上生长即为转化成功．（4）从图中信息可知上述柯斯克隆方案存在的缺点是经限制酶切割作用产生的柯斯质粒载体、真核基因自身也会连接形成多聚体分子． 所以答案是：（1）标记基因 多种限制酶切割位点；（2）Sau3A、Hind III；BamHI、Hind III；b；31﹣47kb；（3）氨苄青霉素；（4）经限制酶切割作用产生的柯斯质粒载体、真核基因自身也会连接形成多聚体分子
【考点精析】解答此题的关键在于理解基因工程的原理及技术的相关知识，掌握基因工程的原理是利用DNA重组技术．