Question

（15分）下图为绿色荧光小鼠制备流程图， Gfp是绿色荧光蛋白基因，请分析回答：

（1）构建表达载体需要的酶是：                         ，表达载体包含绿色荧光蛋白基因Gfp、           、        、终止子和复制原点等。
（2）图中载体上的NEO基因是一种抗生素抗性基因，图中步骤③所用的G418是一种抗生素（对细胞有毒害作用），添加G418的目的是_                                  。
（3）图中所用的胚胎干细胞来自于               。
（4）图中步骤⑤要将细胞注射入图中囊胚的           位置，图中步骤⑥胚胎移植前要对代孕母鼠用激素处理，目的是               。
（5）可以使用           __方法在蛋白质水平上鉴定小鼠是否存在绿色荧光蛋白。

Answer 1

（1）限制酶、DNA连接酶   标记基因  启动子（2）筛选出导入目的基因的胚胎干细胞（3）早期胚胎或原始性腺（4）内细胞团  同期发情处理 （5）抗原－抗体杂交

解析试题分析：（1）基因工程中，基因表达载体的构建需要限制酶、DNA连接酶。表达载体包括启动子、终止子、标记基因、目的基因。（2）NEO基因是一种抗生素抗性基因，而G418 是一种抗生素（对细胞有毒害作用），所以添加G418可将导入目的基因的胚胎干细胞筛选出来。（3）胚胎干细胞来自早期胚胎或原始性腺。（4）内细胞团将发育成各种组织和器官，所以应注射入内细胞团中，胚胎移植前要进行同期发情处理。（5）在蛋白质水平鉴定蛋白质采用抗原－抗体杂交方法。
考点：本题考查基因工程和胚胎工程，意在考查考生识记所列知识点，并能运用所学知识做出合理的判断或得出正确的结论的能力。