Question

（14分）下面是烟草叶片原生质体分离和培养的流程图：

请回答：
（1）酶解时，在纤维素酶和果胶酶的混合液中，还需添加      来提高混合液的渗透压，以利于获得完整的原生质体。
（2）获得原生质体后，可用          方法检测原生质体是否存活。然后将原生质体制成悬浮液，滴加在           上，用显微镜观察并计数。要判定原生质体是否已形成细胞壁，可用      方法鉴别。
（3）欲通过原生质体培养得到愈伤组织，从培养基的成分考虑，配制培养基时需要注意的主要方面有哪些？

Answer 1

（14分）（1）甘露醇（2分）
（2）红墨水染色   血细胞计数板   质壁分离（每空2分）
（3）营养物质的适当配比（3分）和植物生长调节剂的适当配比（3分）

解析试题分析：⑴在获得植物原生质体时，需在0.5～0.6mol/L的苷露醇溶液环境（较高渗透压）下用纤维素酶和果胶酶混合液处理实验材料，将细胞壁消化除去，获得球形的原生质体。
⑵获得原生体后可用红墨水染色法检测，因为生活状态的原生质体细胞膜具有选择透过性，原生质体不会被染上颜色，但如果原生质体死亡，由膜的选择透过性丧失，原生质体会被染成红色；对原生质体进行显微计数，必须将原生质体制成的悬浮液滴加在血细胞计数板上；可用质壁分离实验来检测原生质体是否已形成细胞壁。
⑶要将原生质体培养成愈伤组织，配制培养基时需要注意营养物质的适当配比和植物生长调节剂的适当配比。
考点：本题考查原生质体分离和培养，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识的网络结构的能力。