Question

14分）、某质粒上有SalI、HindⅢ、BamHI三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如下图所示，请回答下列问题。

(1)将抗盐基因导入烟草细胞内,使烟草植株产生抗盐性状，这种新性状(变异性状)的来源属于______                         。
(2)如果将抗盐基因直接导入烟草细胞,一般情况下，烟草不会具有抗盐特性，原因是抗盐基因在烟草细胞中不能复制，也不能______                   。
(3)在构建重组质粒时,应选用______      和_____       _两种酶对______          和_____              _进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性。
(4)基因工程中的检测筛选是一个重要的步骤。为筛选出导入了重组质粒的农杆菌，下图表示运用影印培养法(使一系列培养皿的相同位置上能出现相同菌落的一种接种培养方法)检测基因表达载体是否导入了农杆菌。

培养基除了含有细菌生长繁殖必需的成分外，培养基A和培养基B分别还含有______      、_____            _。从检测筛选的结果分析，含有目的基因的是______      菌落中的细菌。为了确定抗盐烟草是否培育成功，既要用放射性同位素标记的______          作探针进行分子杂交检测，又要用一定浓度的盐水浇灌烟草植株从       水平鉴定烟草植株的耐盐性。
(5)将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用_______         技术，愈伤组织经______              进而形成完整植株,此过程除营养物质外还必须向培养基中添加                     。

Answer 1

（1）基因重组  （2）表达（合成抗盐基因的mRNA） （3）Sal I   Hind III    质粒 抗盐基因的DNA   （4）氨苄青霉素   四环素（氨苄青霉素和四环素）   4和6    抗盐基因 个体性状  （5）植物组织培养   细胞增殖和分化    植物激素（生长素和细胞分裂素）

解析试题分析：（1）基因工程的原理是基因重组。（2）抗盐基因直接导入烟草细胞,烟草不会具有抗盐特性，原因是抗盐基因在烟草细胞中不能复制，也不能合成抗盐基因的mRNA，翻译成相应的蛋白质，即不能表达。（3）根据题干信息，在构建重组质粒时,应选用Sal I 和Hind III 两种限制酶对质粒和抗盐基因进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性。（4）基因工程的第四步是目的基因的检测和鉴定。检测是通过质粒上的标记基因来进行的，即把农杆菌放在含有氨苄青霉素和四环素的培养基上进行培养筛选。根据筛选的结果，含目的基因的是4和6菌落中的细菌。而鉴定是通过DNA分子杂交技术，即用放射性同位素标记的抗盐基因做探针，与受体细胞中的DNA分子进行杂交，来确定目的基因存在，还需要用一定浓度的盐水浇灌烟草植株从个体性状水平来鉴定烟草的耐盐性。（5）将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用采用植物组织培养技术，先经过脱分化形成愈伤组织，再经过再分化，即细胞增殖和分化形成胚状体，最后形成完整的植株。整个培养过程，需要添加植物激素中的生长素和细胞分裂素。
考点：本题考查基因工程的相关知识，意在考查考生理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力。