Question

20．RT-PCR是将mRNA逆转录（RT）和cDNA的聚合酶链式反应相结合的技术，具体过程如图所示，请回答：

（1）过程①需要加入缓冲液、原料、RNA提取物、逆转录酶 和引物A等．
（2）过程②首先要将反应体系的温度升高到95℃，其目的是让逆转录酶变性失活、使mRNA-cDNA杂合双链解开（答对一点即得分），该反应体系中所用的TaqDNA聚合酶至少应能耐受95℃℃高温．
（3）决定RT-PCR扩增片段的是引物，要对图中单链cDNA进行n次循环的扩增，理论上至少需要2ⁿ-1个引物B．
（4）利用RT-PCR技术可用于对某些微量RNA病毒的检测，并可提高检测的灵敏度，原因是增加了待测RNA逆转录产生的DNA的数量（或浓度），便于检测．
（5）RT-PCR过程中主要通过对温度的控制，影响酶的活性，从而使得化学反应高效有序地进行．

Answer 1

分析 1、分析图示，过程Ⅰ是由mRNA形成cDNA的过程，表示逆转录．过程Ⅱ先使mRNA-cDNA杂合双链解开，再以单链的DNA合成双链的DNA，最后利用RCR技术进行DNA复制．
2、PCR技术的原理是模拟生物体内DNA分子复制的过程，利用DNA分子热变形原理，通过控制温度控制控制DNA分子的解聚和结合，DNA分子体内复制过程DNA的解旋是在解旋酶的作用下实现的；PCR扩增DNA片段过程最高经过n次扩增，形成的DNA分子数是2ⁿ个，其中只有2条单链不含有引物．

解答 解：（1）过程Ⅰ是由mRNA形成cDNA的过程，表示逆转录，需要加入缓冲液、原料、RNA提取物、逆转录酶和引物A等．
（2）过程Ⅱ首先要将反应体系的温度升高到95℃，其目的是让逆转录酶变性失活、使mRNA-cDNA杂合双链解开，该反应体系中所用的Taq酶至少应能耐受95℃高温．
（3）决定RT-PCR扩增片段的是引物；过程Ⅱ拟对单链cDNA进行n次循环的扩增，根据DNA分子半保留复制特点可知，该过程理论上至少需要2ⁿ-1个引物B．
（4）利用RT-PCR技术对某些微量RNA病毒进行检测时可提高检测的灵敏度，原因是增加了待测RNA逆转录产生的DNA的数量（或浓度），便于检测．
（5）RT-PCR过程中主要借助对温度的控制，影响酶的活性，从而使得化学反应有序高效地进行．
故答案为：
（1）RNA提取物     逆转录酶
（2）让逆转录酶变性失活、使mRNA-cDNA杂合双链解开（答对一点即得分）   95℃
（3）引物      2ⁿ-1
（4）增加了待测RNA逆转录产生的DNA的数量（或浓度），便于检测
（5）温度

点评 本题考查了基因工程和PCR技术及其应用过程，对于RNA的逆转录、DNA分子复制、多聚酶链式反应扩增DNA片的理解把握知识点间的内在联系及碱基互补配对原则的应用是解题的关键．