Question

2．为了解基因结构，通常选取一特定长度的线性DNA分子，先用一种限制酶切割，通过电泳技术将单酶水解后的片段分离，计算相对大小；然后再用另一种酶对单酶水解片段再进行降解，分析片断大小．下表是某小组进行的相关实验．

已知一线性DNA序列共有5000bp（bp为碱基对）	第一步水解	（单位bp）	第二步水解	产物
	A酶切割	3500	将第一步水解产物分离后，分别用B酶切割	1500   2000
		1000		1000
		500		500
	B酶切割	2000	将第一步水解产物分离后，分别用A酶切割	500  1500
		3000		2000  1000
	经A酶和B酶同时切割	2000    1500    1000      500

（1）该实验中体现出限制酶的作用特点是酶的专一性．
（2）由实验可知，在这段已知序列上，A酶与B酶的识别序列分别为2个和1个．
（3）根据表中数据，请在图1中用箭头标出相应限制酶的酶切位点．
（4）已知BamHⅠ与BglⅡ的识别序列及切割位点如图2所示，用这两种酶和DNA连接酶对一段含有数个BamHⅠ和BglⅡ识别序列的DNA分子进行反复的切割、连接操作，若干次循环后和序列明显增多，该过程中DNA连接酶催化磷酸二酯键键的形成．

Answer 1

分析 限制性核酸内切酶是可以识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶，简称限制酶．由表格分析可知A酶切割后有3段产物，说明酶A有2个切割位点；B酶切割后有2段产物，说明酶B有1个切割位点．

解答 解：（1）该实验中体现出限制酶的作用特点是酶的专一性．
（2）A酶切割后形成3段，所以有2个识别位点，B酶切割后形成2段，所以有1个切割位点．
（3）由于酶B只有一个限制酶切位点，即在2000和3000之间，可以先标注出；又由于酶A又可以将2000的这段切成500和1500的，结合酶A单独切割又可以标注其切割位点，同理标出另一个切割位点，答案如图．

（4）巳知BamHI与BglII的识别序列及切割位点如图2所示．用这两种酶和DNA连接酶对一段含有数个BamHⅠ和BglⅡ识别序列的DNA分子进行反复的切割、连接操作，若干循环后和序列明显增多．DNA连接酶催化形成的是磷酸二酯键．
故答案为：
（1）酶的专一性
（2）2     1
（3）

（4）    磷酸二酯键

点评 本题结合图表，考查基因工程的原理及技术，要求考生识记基因工程的原理、工具及操作步骤，重点考查要求理解和掌握限制酶和DNA连接酶的作用部位和作用对象，能结合表中信息准确答题，属于考纲识记和理解层次的考查．