(现代生物科技)(8分)用小鼠进行DNA重组研究中形成的“基因敲除”技术,能“敲除”DNA分子上的特定基因。该技术的主要过程如下:
第一步:分离小鼠胚胎干细胞,这些细胞中含有需要改造的基因,称“靶基因”。
第二步:获取与“靶基因”同源的DNA片断,利用特定技术在该DNA片段上插入neoR基因
(新霉素抗性基因)成为突变DNA(如下图),使该片段上的靶基因失活。
第三步:将插入neoR基因(新霉素抗性基因)的靶基因转移入胚胎干细胞,再通过同源互换,用失活靶基因取代两个正常靶基因中的一个,完成对胚胎干细胞的基因改造。
第四步:将第三步处理后的胚胎于细胞,转移到特定培养基中筛选培养。
其基本原理如下图所示:

(1)第二步中neoR基因插入靶基因使用的工具酶是                     。neoR基因不仅能使靶基因失活,还是         ;“靶基因失活”的含义是           
(2)从研究者成功获得如上图所示的“敲除”一个靶基因的胚胎干细胞,到将该细胞培育成“基因敲除”小鼠,运用到的生物技术有                          等。
(3)科学家可以通过‘“基因敲除”技术来治疗疾病,上题中获得的基因敲除小鼠,能否直接用来研究基因功能并说明原因                                         
                       。     

融合蛋白是通过DNA重组技术将两个或多个基因的编码区首尾连接,由同一调控序列控制合成的蛋白质。人的表皮生长因子受体(EGFR)是影响癌症发生发展的重要因素,它在肺癌、脑肿瘤等实体瘤中均有大量表达。天花粉蛋白(TCS)是重要天花粉的有效成分,具有抗肿瘤作用。下图是通过基因工程方法将人表皮生长因子基因(EGF)和TCS基因连接起来,利用大肠杆菌生成人表皮生长因子—天花粉蛋白融合蛋白的过程示意图。请回答:

(1)为了建立含有EGF的cDNA文库,应从健康人体的               细胞中提取总mRNA,通过  法合成cDNA。从cDNA文库中提取的EGF的长度比从基因组文库中提取的EGF。利用         技术可以大量扩增EGF,该技术所利用的原理是                               
(2)在①过程中,应使用的限制酶是                       ,在融合蛋白基因的首端还应
插入                   ,它是                          识别和结合的位点。
(3)在②过程中,首先用_________________处理大肠杆菌,使其转变为_________________细胞。
(4)应用___________________        _技术可检测大肠杆菌是否表达出融合蛋白。
(5) 单纯使用天花粉蛋白治疗癌症疗效甚微,而人表皮生长因子——天花粉蛋白融合蛋白疗效显著,其原因是                                                              
(6)某同学为了筛选插入目的基因的表达载体,将处理过的载体分别置于含有氨苄青霉素和四环素的培养基上培养,观察其增殖和表达情况。此设计方案是否合理,            请说明理由                                                                          

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