题目内容

12．苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中，对环境有严重危害．小明同学准备依据图1操作步骤，从处理废水的活性污泥中分离筛选酚降解高效菌株．请回答下列问题：

（1）酚降解菌富集培养基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水，其中可作为碳源的有蛋白胨、苯酚．
（2）将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐增加．以达到富集酚降解菌的目的．若图1平板中菌落过于密集，应进一步稀释涂布，以便于菌落计数与分离．制备平板培养基时除了需要水、营养物质外，还必须添加凝固剂．
（3）图2为连续划线法示意图，在图中③ （填图中序号）区域更易获得单菌落．

（4）采用比色测定法（使用苯酚显色剂）检测降解后的废水中苯酚残留量．先制作系列浓度梯度并进行显色反应，下表中1～5号比色管的苯酚浓度应分别为0、0.2、0.4、0.6、0.8．
管号123456
苯酚浓度（mg/L）1
如果废水为50mg/L 苯酚溶液，降解后约有21%的苯酚残留，则需将残留液稀释③ （填序号：①5   ②10   ③20）倍后，再进行比色．

分析 1、微生物培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求．对异养微生物来说，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源，即有些化合物作为营养要素成分时并不是起单一方面的作用．
2、微生物常见的接种的方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落．
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落．

解答 解：（1）培养基成分中的有机物均可以提供碳源，即蛋白胨、苯酚据可以作为碳源．
（2）分析实验可知，实验目的是筛选酚降解菌，因此将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐增加，以达到富集酚降解菌的目的．若图1平板中菌落过于密集，应进一步稀释涂布，以便于菌落计数与分离．平板培养基属于固体培养基，该培养基需要加入琼脂作为凝固剂．
（3）图2为平板划线法，随着划线次数的增加，菌种进一步被稀释，因此图中③区域更易获得单菌落．
（4）进行实验时，首先需要设置浓度为0的苯酚作为空白对照组，并且6号试管苯酚浓度为1，由此可见，浓度梯度应该为0.2，即表中1～5号比色管的苯酚浓度应分别为0、0.2、0.4、0.6、0.8．如果废水为50mg/L 苯酚溶液，降解后约有21%的苯酚残留，即残留液中苯酚浓度约为10mg/L，与以上6支试管中的浓度相比，需要将残留液稀释20倍后，再进行比色．
故答案为：
（1）蛋白胨、苯酚
（2）增加    稀释涂布    凝固剂
（3）③
（4）0、0.2、0.4、0.6、0.8    ③

点评 本题考查了微生物的分离与培养的有关知识，要求考生能够识记培养基的成分以及配制方法，掌握微生物分离与纯化的两种方法，能够结合表格数据对实验进行完善，属于考纲中识记、理解层次的考查．

练习册系列答案
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