题目内容
【题目】微生物絮凝剂不仅具有絮凝沉降废水的作用，同时具有自身降解的能力，是一类无毒、安全、环保、不造成二次污染的絮凝剂。科研人员通过生物技术筛选稳定、高效的微生物絮凝剂产生菌。请回答问题：
(1)将取自玉米地的土壤，加入______制成菌液，将菌液接种到培养基中进行富集培养，再通过______法接种到固体培养基，数天后，挑选出生长较好、表面光滑带黏性的单个菌落，分别接种到液体培养基中继续培养。
(2)测定初选菌落对高岭土悬液的絮凝效果，挑选出______的菌株，通过测定该菌株基因序列，与产絮凝剂菌株系统发育进化树进行比对，确定为酱油曲霉。
(3)为进一步确定起主要絮凝作用的是菌体细胞还是菌体释放到发酵上清液中的物质，分别测定发酵液中不同成分对高岭土悬液的絮凝效果，结果如图1。
图1
其中D组的作用是排除_______。实验结果表明_______。
(4)为研究微生物絮凝剂对生活污水中有机物去除效果的影响因素（有机物污染程度用生化需氧量COD表示），科研人员又进行了如下实验。
i.向生活污水中加入4 mL微生物絮凝剂，均分为多组，pH值分别调到1～9，将温度设定为该菌最适生活温度30℃，培养后取样测定COD去除率。结果见图2。
ii.调节生活污水pH值为7，均分为多组，分别加入不同剂量的微生物絮凝剂，将温度设定为30℃，培养后取样测定COD去除率。结果见图3。
①由结果可知，COD去除效果最佳的条件是_______。
②上述实验结论不严谨，请从实验设计中寻找原因_______。
【答案】无菌水 稀释涂布平板（或平板划线） 絮凝率最高 培养基成分对高岭土悬液絮凝效果的干扰 起主要絮凝作用的是菌体释放到发酵上清液中的物质 ①pH为7，投加量为1 ml 4 mL微生物絮凝剂下测得的最适pH不一定是该菌生活的最适pH，应该是各组pH下均设系列投放量，或各组投放量下均设系列pH或ii实验中加入不同剂量的微生物絮凝剂导致各组实验的液体总量存在差异
【解析】
1、纯化细菌或真菌的方法：
①通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
②稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。
2、分析图1，絮凝率从大到小依次是：上清液>菌体细胞壁悬液>菌体细胞内液>培养基，其中D组的作用是排除培养基成分对高岭土悬液絮凝效果的干扰，实验结果表明起主要絮凝作用的是菌体释放到发酵上清液中的物质。
3、向生活污水中加入4 mL微生物絮凝剂，均分为多组，pH值分别调到1～9，将温度设定为该菌最适生活温度30℃，培养后取样测定COD去除率，结果如图2，pH为7时，对COD的去除率最高。低于7或高于7，去除率都降低。
4、调节生活污水pH值为7，均分为多组，分别加入不同剂量的微生物絮凝剂，将温度设定为30℃，培养后取样测定COD去除率，结果见图3，投加量为1 ml，对COD的去除率最高，但投加入不同剂量的微生物絮凝剂比未投加的对COD的去除率高。
据微生物培养的原理和过程：
（1）将取自玉米地的土壤，加入无菌水制成菌液，将菌液接种到培养基中进行富集培养，再通过稀释涂布平板法或平板划线法接种到固体培养基。
（2）由于本实验筛选的是微生物絮凝剂产生菌，在测定初选菌落对高岭土悬液的絮凝效果，挑选出絮凝率最高的菌株。
（3）由图1可知，其中D组只含培养基，作用是排除培养基成分对高岭土悬液絮凝效果的干扰；絮凝率从大到小依次是：上清液>菌体细胞壁悬液>菌体细胞内液>培养基，表明起主要絮凝作用的是菌体释放到发酵上清液中的物质。
（4）①由结果可知，COD去除效果最佳的条件是pH为7和投放量为1mL时。
②上述实验结论不严谨，因为4 mL微生物絮凝剂下测得的最适pH不一定是该菌生活的最适pH，因此可将实验改进为在各组pH下均设系列投放量，或各组投放量下均设系列pH或ii实验中加入不同剂量的微生物絮凝剂导致各组实验的液体总量存在差异。
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【题目】“地沟油，城市下水道里悄悄流淌的垃圾”。地沟油最大的来源为城市饭店下水道的隔油池。对地沟油的处理是一个难题，用脂肪酶处理地沟油具有广泛的应用前景。为获得高产脂肪酶的菌株，并将之用于产业化，某研究小组进行了一些实验。请回答下列相关问题：
（1）欲分离筛选出能分泌脂肪酶的细菌，应配制以___________为唯一碳源的培养基，这种培养基从功能上看属于___________培养基。
（2）经过稀释，在平板上接入0.1mL稀释液并涂布，经适当时间培养后，在平板上计数菌落，据此可计算出每毫升培养液中的活菌数。这种计数方法得到的结果一般比实际值偏小，原因可能是___________。
（3）经上述实验得到如下表所示的结果，为保证结果准确，一般选择___________稀释倍数的平板进行统计。有同学认为稀释操作时，可以将1mL培养液加适量无菌水直接稀释至上述稀释倍数，这样可以简化步骤，省去梯度稀释的麻烦。该方法___________(填“合理”或“不合理”)，因为___________。
（4）如果脂肪酶的产业化需要其活性在固定化处理时不受损失，且在多次重复使用后仍能维持稳定的酶活性，则应选择下表中的___________法固定化工艺。使用分泌脂肪酶细菌与固定化脂肪酶进行生产，都需要适宜的___________(填序号)。
①温度 ②水 ③营养 ④pH
酶固定化方法 | 吸附法 | 共介结合法 | 包埋法 |
制备难易 | 易 | 难 | 难 |
酶活力损失 | 小 | 大 | 小 |
酶与载体的结合能力 | 较弱 | 强 | 强 |
成本 | 低 | 高 | 中 |
对底物和产物的要求 | 无特殊要求 | 无特殊要求 | 分子量需比较小 |