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【题目】【生物一选修3:现代生物科技专题】
利用生物工程技术，可从转基因奶山羊乳汁中分离获得人凝血因子IV，用于血友病的治疗。请回答下列问题：
（1）根据凝血因子IV基因上游和下游的碱基序列，可用_____________技术获取并扩增基因；构建该基因表达载体时，所用到的工具酶是_____________，将人凝血因子IV基因与_____________的启动子等调控组件组在一起。
（2）将目的基因表达载体导入奶山羊受精卵的常用方法是__________________________。
（3）在体外胚胎培养时，应选用囊胚的_______________________进行DNA分析，用于选择雌性胚胎。此期的胚胎也适于胚胎分割移植，此技术的优点是__________________________。
（4）人凝血因子IV是一种胞外酶，该蛋白的加工是在________________________等细胞器上进行的。人凝血因子IV只在乳腺细胞合成的原因是_______________________________________。
【答案】 PCR 限制性核酸内切酶和DNA连接酶 乳腺蛋白基因 显微注射 滋养层细胞 提高胚胎的利用率 内质网、高尔基体（核糖体、线粒体不给分） 基因的选择性表达
【解析】试题分析：本题考查基因工程、细胞工程和胚胎工程等知识，要求考生识记基因工程的基本操作步骤，识记动物细胞培养的条件，识记胚胎工程的相关技术及操作，能结合所学的知识准确答题。
（1）可以根据基因编码序列两端的部分碱基序列设计引物，用PCR技术进行体外大量扩增获得目的基因。构建该基因表达载体时，需要限制酶内切酶切割目的基因和运载体，再用DNA连接酶链接，形成表达载体。启动子是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质．终止子也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端。
（2）受体细胞是动物细胞，常用显微注射法将目的基因导入受体细胞中。由于受精卵细胞大易操作、营养物质含量高、细胞全能性高，因此常被作为受体细胞选用。
（3）在做胚胎性别鉴定时，需要取囊胚的滋养层细胞做DNA分析，进行性别鉴定．此期的胚胎也适于胚胎分割移植，胚胎分割技术具有充分发挥雌性动物的生殖潜力（快速大量繁殖）的优点。
（4）分泌蛋白在内质网上的核糖体上合成，进入内质网进行加工、分类、包装，形成囊泡进入高尔基体，由高尔基体进行进一步加工，形成囊泡，运向细胞膜，由细胞膜分泌到细胞外．由于基因的选择性表达，所以人凝血因子IV只在乳腺细胞合成。
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