Question

【题目】为增加油菜种子的含油量，研究人员尝试将酶D基因与位于叶绿体膜上的转运肽基因相连，导入油菜叶片细胞并获得了转基因油菜品种．
（1）从陆地棉基因文库中获取酶D基因，从拟南芥基因文库中获取转运肽基因，然后利用技术分别进行扩增．
（2）如图1，选用图中的限制酶处理两个基因后再用酶处理，得到（填图中字母）端相连的融合基因．
（3）将上述融合基因插入图2所示Ti质粒的T﹣DNA中，构建并导入农杆菌中．将获得的农杆菌接种在含的固体平板上培养得到单菌落，再利用液体培养基震荡培养，得到用于转化的浸染液．
（4）剪取油菜的叶片放入浸染液中一段时间，此过程的目的是 ， 进一步筛选后获得转基因油菜．
（5）用DNA﹣RNA分子杂交技术确定融合基因是否完成了（转录、翻译）．

Answer 1

【答案】
（1）PCR（聚合酶链式反应/多聚酶链式反应）
（2）ClaⅠ；DNA连接；AD
（3）基因表达载体；四环素
（4）将目的基因导入受体细胞
（5）转录
【解析】解：（1）研究人员依据基因的已知序列设计引物，采用PCR法从陆地棉基因文库中获取酶D基因，从拟南芥基因文库中获取转运肽基因．（2）在上述引物设计时，分别在引物中加入如图甲所示酶的识别序列，这样可以用ClaⅠ限制酶和DNA连接酶处理两个基因后，得到A、D端相连的融合基因．（3）将上述融合基因插入图乙所示Ti质粒的T﹣DNA中，构建表达载体即重组质粒并导入农杆菌中．将获得的农杆菌接种在含四环素的固体平板上培养得到单菌落，再利用液体培养基震荡培养，可以得到用于转化的浸染液．（4）剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，此过程的目的是利用农杆菌将融合基因导入受体细胞，进一步筛选后获得转基因油菜细胞．该细胞通过植物组织培养技术，可培育成转基因油菜植株．（5）用DNA﹣RNA分子杂交技术确定融合基因是否完成了转录，产生了mRNA；用抗原﹣抗体杂交法可检测转基因油菜植株中的融合基因是否成功表达．

所以答案是：（1）PCR（聚合酶链式反应/多聚酶链式反应）；（2）ClaⅠ；DNA连接；AD；（3）基因表达载体；四环素；（4）将目的基因导入受体细胞；（5）转录。

【考点精析】本题主要考查了基因工程的原理及技术的相关知识点，需要掌握基因工程的原理是利用DNA重组技术才能正确解答此题．