5.萌发的禾谷类种子中淀粉酶活性较强,主要有α-淀粉酶和β-淀粉酶.α-淀粉酶不耐酸、较耐热,在PH为3.6以下迅速失活,而β-淀粉酶不耐热,在70℃15min后失活.根据它们的这种特性,可分别测定一种酶的催化效率.请协助完成“测定小麦种子中α-淀粉酶催化效率”的实验.
实验材料:萌发3天的小麦种子(芽长约1cm).
主要试剂及仪器:1mg/mL的标准麦芽糖溶液、5%淀粉溶液、斐林试剂、蒸馏水、石英砂恒温水浴锅等.
实验步骤:
步骤一:制作麦芽糖标准.取 7 支干净的具塞刻度试管,编号,按表加入试剂,再将试管置于60℃水浴中加热 2min,取出后按试管号顺序排列.
试剂试管号
1234567
麦芽糖
标准液
(mL)
00.20.61.01.41.62.0
蒸馏水
(mL)
2.0
麦芽糖
含量
(mg)
00.20.61.01.41.62.0
斐林试
剂(mL)
2.02.02.02.02.02.02.0
步骤二:制备酶液.
研磨:5g萌发的小麦种子+少量石英砂+10mL蒸馏水→离心分离:3000转/min,10min→获取酶液
步骤三:将装有淀粉酶溶液的试管置于70℃水浴15min,取出后迅速冷却.
步骤四:另取四支试管,编号A、B、C、D,向A、B试管中各加5mL 5%淀粉溶液,向C、D试管中分别加入2mL已经处理的酶溶液(忽略少量的麦芽糖)和蒸馏水,将四支试管置于40℃恒温水浴中保温10min,然后将C、D试管中的溶液分别加入到A、B试管中,摇匀后继续在40℃恒温水浴中保温10min.
步骤五:分别取A、B试管中反应溶液各2mL,向其中分别加入2mL斐林试剂,60℃水浴加热2min后,观察颜色变化.
结果分析:将A试管中颜色与第①步中获得的麦芽糖标准进行比较,获得该试管中麦芽糖浓度,并计算出α-淀粉酶催化效率.
分析上述步骤回答:
(1)步骤一的2~7试管中加入蒸馏水的量分别是1.8mL、1.4mL、1.0mL、0.6mL、0.4mL、0mL.(单位mL).
(2)步骤三的实验操作是70℃水浴中15min;.
(3)步骤五的实验操作是分别取A、B试管中反应溶液各2mL,向其中分别加入2mL斐林试剂,60℃水浴加热2min后,观察颜色变化.
(4)实验中B试管所起的具体作用是检测实验使用的淀粉溶液中是否存在还原糖..

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