Question

【题目】乳头瘤病毒HPV可导致人患宫颈癌，科研人员将HPV某外壳蛋白A基因构建成表达载体，经包装或直接注入体内，表达出相应抗原，诱导机体产生免疫反应。该方法获得的疫苗称为DNA疫苗。请回答下列问题：

（1）获取A基因的方法：

①方法一：提取HPV的DNA，利用PCR技术扩增A基因时，至少经过_______次循环才能获得该基因，此过程中利用的原料是____________________。

②方法二：从宿主细胞中提取总RNA，以与__________________互补的一段单链DNA作为引物，加入____________酶获得cDNA，然后经PCR扩增获得大量的A基因。

（2）构建基因表达载体时，常用不同的限制酶切割质粒与目的基因，其具备的优势是________________________。

（3）DNA疫苗是预防性生物制品，与传统疫苗相比其具备的优点有__________________（至少一点），而单克隆抗体作为治疗性生物制品，具备的优点是_______________________，制备单克隆抗体需要以_________________技术为基础。

Answer 1

【答案】3 四种游离的脱氧核苷酸（dNTP） A基因的mRNA（A基因转录出的mRNA） 逆转录（反转录） 避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接 DNA疫苗作用时间长、DNA疫苗更安全、结构简单、更容易保存 特异性强、灵敏度高、可大量制备 动物 细胞培养和动物细胞融合

【解析】

该题主要考察了基因工程的相关知识。获取目的基因的方法一般有从基因文库中选择、利用mRNA反转录合成、利用DNA合成仪用化学方法人工合成、利用PCR技术扩增。单克隆抗体常常以动物细胞培养和动物细胞融合技术为基础。

（1）①方法一：根据PCR的特点，至少需要3次循环才能从DNA分子中获得目的基因；PCR实质是DNA体外复制过程，因此需要四种游离的脱氧核苷酸为原料；

②方法二：利用逆转录方法获得目的基因，逆转录获得目的基因需设计引物，该引物需要能与A基因的mRNA配对；通过逆转录得到DNA单链，该过程需要逆转录酶的催化，然后在Taq聚合酶的作用下得到双链DNA分子，然后继续PCR扩增得到大量的A基因；

（2）用不同限制酶切割目的基因和质粒可以防止目的基因和质粒的自身环化和随意连接；

（3）DNA疫苗具有作用时间长、更安全、结构简单、更容易保存的特点；而单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高、可大量制备的特点；一般情况下制备单克隆抗体需以动物细胞培养和动物细胞融合技术为基础。