Question

9．已知甲种农作物因受到乙种昆虫危害而减产，乙种昆虫食用某种原核生物分泌的丙种蛋白质后死亡．因此，可将丙种蛋白质基因转入到甲种农作物体内，使甲种农作物获得抗乙种昆虫危害的能力．回答下列问题：
（1）为了获得丙种蛋白质的基因，根据丙种蛋白质的基因序列，推测出丙种蛋白质的mRNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测其DNA的碱基序列；再通过化学方  法合成所需基因．
（2）构建基因表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生粘性末端，也可能产生平末端．若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生相同（相同、不同）粘性末端的限制酶．基因表达载体中标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来．
（3）为了检测丙种蛋白质的基因是否转录出了mRNA，可用标记的丙种蛋白质的基因片段作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为DNA-RNA分子杂交．
（4）将丙种蛋白质基因通过农杆菌转化法导入甲种农作物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的T-DNA 中，然后用该农杆菌感染甲种农作物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞中染色体上，使目的基因的遗传特性得意稳定维持和表达．

Answer 1

分析 本题考生着重从目的基因的获取和基因工程的操作工具着手解答．获得目的基因的方法：①从基因文库中获取 ②利用PCR技术扩增 ③人工合成（化学合成）；DNA重组技术至少需要三种工具：限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶、运载体．

解答 解：（1）在已知蛋白质的氨基酸序列的情况下，可根据氨基酸和碱基的对应关系，推出合成该蛋白质的mRNA序列，依据碱基互补配对原则再推出DNA的碱基序列，用DNA合成仪通过化学方法来合成目的基因．
（2）用限制酶切割DNA后，可能产生黏性末端，也可能产生平口末端．若要在限制酶基因工程中，往往采用同种限制酶切割目的基因和质粒以产生相同的黏性末端，再用DNA连接酶使其直接进行连接．标记基因用于鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来．
（3）为了检测目的基因是否转录出了mRNA，可采用分子杂交技术，即用放射性同位素标记的胰岛素基因作探针与mRNA杂交．
（4）采用农杆菌转化法将目的基因导入植物细胞时，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的T-DNA中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的染色体DNA上．
故答案为：
（1）基因　碱基
（2）平 相同   鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来
（3）DNA-RNA分子杂交
（4）T-DNA 染色体

点评 本题考查基因工程中目的基因的获取、工具酶以及目的基因的检测等相关知识，意在考查考生的识记能力和理解能力，难度不大．