题目内容
【题目】乙肝病毒（HBV）是部分双链的DNA病毒，乙肝病毒引起的乙型肝炎不仅感染性高，而且危害大。下面是利用现代生物技术治疗乙型肝炎的三种方法。请回答下列问题：
（1）方法Ⅰ属于使用基因工程方法进行治疗，可以用___________技术扩增HBV表面抗原基因。过程①不仅需要构建___________，还需要对酵母菌进行处理，使其成为___________细胞，可通过___________技术确定转基因酵母菌是否培养成功。
（2）方法Ⅱ中，培养细胞1时，培养液中除应含有细胞所需的营养物质外，还应添加___________等一些天然成分，经过选择性培养得到的细胞2还需进行克隆化培养和___________检测，再经多次筛选，就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。与植物细胞融合相比，过程②特有的方法是用___________处理。
（3）方法Ⅲ运用的是现在流行的基因编辑技术——CRISPR/Cas9系统，科学家借助纳米脂质颗粒将Cas9蛋白的mRNA和引导RNA通过___________方式送入肝细胞内，然后Cas9mRNA经翻译合成Cas9蛋白，接着Cas9蛋白和引导RNA组装成 CRISPR/Ca59系统进入细胞核中，将整合在染色体上的乙肝病毒DNA进行基因编辑，使病毒DNA___________。由此可推测，CRISPR/Cas9系统中的Cas9蛋白可能是切割病毒DNA___________键的酶。
【答案】 PCR 基因表达载体 感受态 抗原一抗体杂交 动物血清（或血浆） 抗体 灭活的病毒 胞吞 突变或降解 磷酸二酯
【解析】试题分析：本题考查了基因工程和细胞工程等有关知识，能够掌握基因工程的操作步骤，识记基因工程的操作工具及作用，识记植物细胞融合和动物细胞融合的区别，能够结合所学知识准确答题。
（1）PCR技术可以对DNA分子在体外进行大量复制，因此扩增HBV表面抗原基因，可以用PCR技术。方法Ⅰ中过程①需要构建基因表达载体，导入到酵母菌体内时，常用Ca2+处理使酵母菌成为感受态细胞，从而有利于重组质粒的导入。从分子水平上检测转基因在酵母菌体内是否表达成功，可以采用抗原-抗体杂交方法。
（2）方法Ⅱ中，培养细胞1时，培养液中除加入必要的营养物质外，还需加入动物血清、血浆等一些天然成分。经过选择性培养得到的细胞2还需进行克隆化培养和抗体检测，再经多次筛选，就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。植物细胞融合有物理法（离心、振动、电激等）和化学法（聚乙二醇），过程②是动物细胞融合，常用物理法（离心、振动、电激等）、化学法（聚乙二醇）、生物法（灭活的病毒），所以过程②特有的方法是用灭活的病毒处理。
（3）大分子进入细胞的方式是胞吐，因此借助纳米脂质颗粒将Cas9蛋白的mRNA和引导RNA通过胞吞方式送入肝细胞的。由图可知，Cas9蛋白和引导RNA组装成 CRISPR/Ca59系统进入细胞核中，将整合在染色体上的乙肝病毒DNA进行基因编辑，使病毒DNA突变或降解。要使DNA分子断裂，需要催化脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键水解，因此可推测，CRISPR/Cas9系统中的Cas9蛋白可能是切割病毒DNA磷酸二酯键的酶。
