题目内容
微生物的分离、培养和计数是现代生物工程应用中的重要环节。图为大肠杆菌分离和
培养过程中部分操作示意图。请分析回答下列问题：
（1）实验过程中对培养基、培养皿、实验操作者的双手所采用的灭菌、消毒方法依次是 、 、 。
（2）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是 。
（3）图示是利用 法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步 分散到培养基的表面。在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线的原因是 。
（4）关于图示的操作方法和结果，叙述正确的是 。
A．操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌。
B．划线操作须在火焰上进行。
C．在5区域中才可以提到所需菌落。
D．在1、2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环灭菌。
（5）若要培养具有耐高和耐酸特性的酵母菌，制备选择培养基时在基本培养的基础上，注意 和 ，其目的是 。
（1）高压蒸汽灭菌 干热灭菌 化学消毒
（2）将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生（2分）
（3）平板划线 稀释 以免接种环温度太高，杀死菌种（2分）
（4）D（2分）
（5）添加高浓度蔗糖(葡萄糖) 调低pH 提供高糖和酸性的筛选环境（2分）
【解析】
试题分析：（1）无菌操作技术有消毒和灭菌，消毒有煮沸消毒法、巴氏消毒法和化学药剂消毒法，灭菌有灼烧灭菌法适用于接种工具、干热灭菌法适用于玻璃器皿和金属工具、高压蒸汽灭菌法适用于培养基及容器的灭菌。（2）略；（3）接种有平板划线法和稀释平板法，本题是后者，反复把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，可以实现对菌种的分离，在操作过程中灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线的原因是以免接种环温度太高杀死菌种；（4）在1、2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环灭菌主要是稀释作用；（5）选择培养基的考查，根据菌种的特殊性制定培养基，使其他菌群不能在此生长，达到选择的目的。
考点：本题考查微生物的分离和培养，意在考查考生能理解所学知识的要点。
生物乙醇是以生物为原料生产的可再生能源。我国利用农作物废弃物(秸秆)生产乙醇，其技术流程为：纤维素酶分解→酵母菌发酵→蒸馏→成品。如果向含有纤维素培养基中加入刚果红染液时，刚果红会与纤维素形成红色复合物，而呈现红色，如果纤维素被降解，则培养基表面会形成以纤维素分解菌为中心的透明圈。 请分析回答下列问题：
71、纤维素酶可以从能分解纤维素的细菌培养液中提取。某同学设计了从土壤中分离纤维素分解菌的实验流程：土壤取样→选择培养→梯度稀释→鉴别培养。
①最好选择 环境采集土样。
②配置培养基时，各种成分在熔化后分装前必须进行 ，接种前要进行 。在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在无菌条件下进行。在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的倒平板操作时，平板冷凝后，应将平板倒过来放置，这样做的目的是 。
③以下是两种培养基配方：
A培养基配方：
| KH2P04 | Na2HP04 | MgS04.7H20 | 纤维素酶 | 葡萄糖 | 尿素 | 琼脂 |
| 1.4g | 2.1g | 0.2g | 1g | 10.0g | 1.0g | 15.og |
| KH2P04 | NaN03 | Na2HP04.7H20 | MgS04.7H20 | KCl | 纤维素粉 | 酵母膏 | 水解酪素 |
| 0．9g | lg | 1．2g | 0．5g | 0．5g | 5g | 0．5g | 0．5g |
④为了鉴别纤维素分解菌和进一步纯化菌种，可以在鉴别培养基中加入刚果红染液，将筛选获得的菌液稀释后用 法接种到鉴别培养基上，然后挑选产生 的菌落作为菌种进行扩大培养。
72、进行工业化酶解时，为了使纤维素酶能反复使用，可以采用酶固定化技术，其具体方法包括如下图所示的三种，则①表示 、②表示 、③表示载体结合法。
