Question

5．回答有关基因工程的问题
嗜热土壤芽胞杆菌产生的β-葡萄糖苷酶（BglB）是一种耐热纤维素酶，为使其在工业生产中更好地应用，开展了以下试验．
（1）通常情况下，获得的目的基因需要进行扩增，最简便的方法是PCR扩增 技术．
如图为质粒限制酶酶切图谱．下表为限制酶的酶切位点．

限制酶	BamHⅠ	HindⅢ	EcoRⅠ	NdeⅠ
识别序列 及切割位点	G↓GATCC	A↓AGCTT	G↓AATTC	CA↓TATG

（2）如图的质粒上有多个酶切位点，本实验中没有选择XbaI酶切割质粒，原因是由于Xbal在质粒不止一个酶切位点．
（3）分析如图，可选择两种不同的限制酶NdeⅠ 和BamHⅠ切割质粒，以防止质粒自身环化．质粒被切割后，可用DNA连接酶 将其与目的基因连接．在动物基因工程中将目的基因导入受体细胞时通常的方法是显微注射技术．
（4）大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述建构好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为转基因的大肠杆菌分泌出有活性的BglB酶．

Answer 1

分析 基因表达载体的组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因．
限制酶：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂．
目的基因应插入启动子和终止子之间

解答 解：（1）通常情况下，获得的目的基因需要进行扩增，最简便的方法是PCR扩增技术．
（2）根据启动子和终止子的生理作用可知，目的基因应导入启动子和终止子之间．图中看出，两者之间存在于三种限制酶切点，但是由于Xbal在质粒不止一个酶切位点，因此本实验中没有选择XbaI酶切割质粒．
（3）分析如图，以防止质粒自身环化，扩增的bglB基因两端需分别引入NdeⅠ和BamHⅠ不同限制酶的识别序列，在用DNA连接酶将其与目的基因和质粒连接成重组质粒．如果受体细胞是动物细胞，常用显微注射技术将目的基因导入受体细胞．
（4）大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述建构好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为转基因的大肠杆菌分泌出有活性的BglB酶．
故答案为：
（1）PCR扩增
（2）由于Xbal在质粒不止一个酶切位点
（3）NdeⅠBamHⅠDNA连接酶   
（4）转基因的大肠杆菌分泌出有活性的BglB酶

点评 本题考查基因工程原理，考查学生分析问题和解决问题的能力．