Question

14．如图甲、乙，箭头表示限制酶的酶切位点，amp^R表示氨苄青霉素抗性基因，neo^R表示青霉素抗性基因．现有MboI、SamI两种限制酶，它们的识别序列和酶切位点分别为↓GATC、CCC↓GGG．据图回答下列问题：
（1）获取目的基因是基因工程的第一步，目的基因主要是指编码蛋白质的基因，也可以是一些具有调控作用的因子．在目的基因的一条链上，相邻的两个碱基之间依次由脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖连接．
（2）利用限制酶MboI和SamI分别对甲、乙进行酶切，若用E•coli DNA连接酶进行连接，则可以得到1种重组质粒；若用T₄DNA连接酶进行连接，则可以得到2种重组质粒．
（3）要使目的基因在受体细胞中，能正常表达和发挥作用，表达载体必须具备的结构是启动子、终止子．

Answer 1

分析 1、基因工程的工具：
（1）限制酶：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂．
（2）DNA连接酶：连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键．
（3）运载体：常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒．
2、基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）目的基因主要是指编码蛋白质的基因，也可以是一些具有调控作用的因子．由于目的基因是DNA的片段，所以在目的基因的一条链上，相邻的两个碱基之间依次由脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖连接．
（2）由于E•coliDNA连接酶只能连接双链DNA的黏性末端，而T₄DNA连接酶既可以连接双链DNA的黏性末端，又可以“缝合”双链DNA的齐平末端，所以若用E•coli DNA连接酶进行连接，则可以得到1种重组质粒；若用T₄DNA连接酶进行连接，则可以得到2种重组质粒．
（3）要使目的基因在受体细胞中，能正常表达和发挥作用，表达载体必须具备的结构是启动子、终止子，此外还有目的基因和标记基因．
故答案为：
（1）编码蛋白质的基因  脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖
（2）1   2
（3）启动子、终止子

点评 本题结合题图，考查基因工程的相关知识，意在考查学生分析题图提取有效信息的能力；能理解所学知识要点，运用所学知识解决问题的能力．