Question

1．根据基因工程的有关知识，回答下列问题：
（1）cDNA文库属于部分基因文库，其构建方法是：用某种生物发育的某个时期的mRNA通过反转录产生cDNA片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中．
（2）切割DNA分子的工具是限制性核酸内切酶，它能使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，形成黏性末端或平末端．
（3）基因工程中所使用的DNA连接酶有两类．既可以“缝合”黏性末端，又可以“缝合”平末端的是T₄DNA连接酶．
（4）将目的基因导人植物细胞采用最多的方法是农杆菌转化法；如果受体细胞是大肠杆菌，需要用Ca²⁺处理细胞，使之成为感受态细胞，才能吸收DNA分子．

Answer 1

分析 1、基因工程的工具：
（1）限制酶：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂．
（2）DNA连接酶：连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键．
（3）运载体：常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒．
2、基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）cDNA属于部分基因文库，构建方法是利用某种生物发育的某个时期的mRNA通过逆转录产生cDNA片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中．
（2）切割DNA分子的工具是限制性核酸内切酶，它能使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，形成黏性末端或平末端．
（3）DNA连接酶根据来源分为两类：T₄DNA连接酶和E•coliDNA连接酶，其中E•coliDNA连接酶只能连接双链DNA的黏性末端，而T₄DNA连接酶既可以连接双链DNA的黏性末端，又可以“缝合”双链DNA的平末端．
（4）将目的基因导人植物细胞采用最多的方法是农杆菌转化法；如果受体细胞是大肠杆菌，需要用Ca²⁺处理细胞，使之成为感受态细胞，才能吸收DNA分子．
故答案为：
（1）部分   mRNA   载体
（2）限制性核酸内切酶   磷酸二酯键
（3）T₄
（4）农杆菌转化法   Ca²⁺

点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的工具及作用、基因工程的操作步骤，属于考纲识记层次的考查．