Question

【题目】CAR-T细胞是利用基因工程制备的一种T细胞，其表面的嵌合抗原受体（简称CAR）能直接识别肿瘤细胞的特异性靶抗原（如CD19）。研究人员尝试用CAR-T免疫疗法治疗某种B细胞淋巴瘤（简称MCL）。请回答问题：

（1）正常的B细胞在__________免疫中识别抗原并接受T细胞产生的__________刺激后增殖分化为浆细胞，产生大量抗体。在致癌因子的作用下，B细胞由于遗传物质发生变化而转化为具有无限__________能力的癌细胞，造成免疫功能受损。

（2）下图为研究人员制备的CAR-T细胞特异性识别MCL细胞的示意图。

把特异性识别__________的抗体基因及胞内传导信号分子基因等串联在一起获得融合基因，将其与特定病毒构建成__________，导入体外培养的人T细胞中得到CD19-CAR-T细胞。提取该细胞中的__________分子，经逆转录后进行PCR扩增，以检测融合基因的表达。

（3）为研究CD19-CAR-T细胞对MCL细胞的杀伤效果，进行了如下实验：

①选取4种肿瘤细胞，每种各收集3管。将两种T细胞分别与肿瘤细胞共培养12小时后，统计各组肿瘤细胞数（用C表示），并计算杀伤率，结果如下表所示。

组别		杀伤率/%
		CD19-CAR-T细胞	未被修饰的T细胞
有CD19的肿瘤细胞（MCL细胞）	Rec-1	60	17
	Maver-1	75	32
	Jeko-1	78	30
无CD19的肿瘤细胞		24	13

表中杀伤率=（C对照组- C实验组）/C对照组×100%，公式中的对照组为__________。上述结果表明__________。

②研究人员欲进一步探究CD19-CAR-T细胞对肿瘤细胞杀伤的机理，已知IL-2、TNF-α是两种杀伤性细胞因子。请在下表中的空白处填写相应内容，完成实验方案。

组别	T细胞种类	肿瘤细胞种类	IL-2的释放量	TNF-α的释放量
甲	CD19-CAR-T细胞	ⅰ______________	1.89%	0.2%
乙	ⅱ______________	有CD19的肿瘤细胞	30.1%	32.49%

实验证实，CD19-CAR-T细胞特异性识别CD19靶抗原进而引起杀伤性细胞因子的大量释放。

（4）在上述实验的基础上，欲将CAR-T免疫疗法用于临床上MCL患者的治疗，还需要进行哪些方面的研究？__________（写出一个方面即可）。

Answer 1

【答案】 体液 淋巴因子 增殖 CD19 基因表达载体 RNA 不与T细胞共培养的肿瘤细胞 CD19-CAR-T细胞对肿瘤细胞的杀伤效果强于未被修饰的T细胞；CD19-CAR-T细胞对有CD19的肿瘤细胞的杀伤效果强于无CD19的肿瘤细胞 无CD19的肿瘤细胞 CD19-CAR-T细胞 在动物体内进行免疫治疗实验，检测对MCL的治疗效果；评估CD19-CAR-T细胞对动物体主要组织器官和正常细胞的毒理作用（合理即给分）

【解析】【试题分析】

本题结合制备能特异性识别MCL细胞的CD19-CAR-T细胞。并探究其杀伤效果及原理，综合考查体液免疫、基因工程的相关知识，以及实验分析能力。需要考生首先从题图和题干中获取有用信息，然后结合题意梳理相关知识点，构建知识网络，最后对各小题进行分析作答。

（1）正常的B细胞在体液免疫中识别抗原并接受T细胞产生的淋巴因子刺激后增殖分化为浆细胞，产生大量抗体；在致癌因子的作用下，原癌基因和抑癌基因会发生突变，导致B细胞的遗传物质发生变化，进而转化为具有无限增殖能力的癌细胞，造成免疫功能受损。

（2）据图可知，T细胞表面的嵌合抗原受体（简称CAR）能直接识别肿瘤细胞的特异性靶抗原（如CD19），所以要制备能特异性识别MCL细胞的CAR-T细胞，需要把特异性识别CD19的抗体基因及胞内传导信号分子基因等串联在一起获得融合基因，将其与特定病毒构建成基因表达载体，导入体外培养的人T细胞中得到CD19-CAR-T细胞；可以提取该细胞中的RNA分子，经逆转录后进行PCR扩增，以检测融合基因的表达。

（3）①实验中每种肿瘤细胞各收集3管，其中两管分别与两种T细胞共培养，还有一管肿瘤细胞不与T细胞共培养，作为空白对照。公式中的对照组即为不与T细胞共培养的肿瘤细胞；根据表中结果可知，CD19-CAR-T细胞对肿瘤细胞的杀伤效果强于未被修饰的T细胞；CD19-CAR-T细胞对有CD19的肿瘤细胞的杀伤效果强于无CD19的肿瘤细胞。

②欲进一步探究CD19-CAR-T细胞对肿瘤细胞杀伤的机理，即探究CD19-CAR-T细胞对癌细胞的杀伤效果高是否与肿瘤细胞的CD19有关，所以该实验的自变量是肿瘤细胞的种类，T细胞的种类属于无关变量，因此表格中的ⅰ处填无CD19的肿瘤细胞；ⅱ处填CD19-CAR-T细胞。

（4）欲将CAR-T免疫疗法用于临床上MCL患者的治疗，还需要在动物体内进行免疫治疗实验，检测对MCL的治疗效果；评估CD19-CAR-T细胞对动物体主要组织器官和正常细胞的毒理作用。