题目内容
17．
人外周血单核细胞能合成白细胞介素2（IL-2），该蛋白可增强机体免疫功能，但在体内易被降解．研究人员将IL-2基因与人血清白蛋白（ HSA）基因拼接成一个融合基因，并在酵母菌中表达，获得具有IL-2生理功能、且不易降解的IL-2-HSA融合蛋白，其技术流程如图所示．请据图回答：（1）图中②表示逆转录过程，③过程需要限制酶EcoRI、限制酶BglⅡ和DNA连接酶．
（2）限制酶的功能是识别双链DNA分子中特定的脱氧核苷酸序列，并断开两个特定的脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键；限制酶BglⅡ的识别位点是表达载体1中的a（填“a”或“b”）．
（3）表达载体2导入酵母菌后，融合基因转录出的mRNA中，与IL-2蛋白对应的碱基序列不能含有终止（填“起始”或“终止”）密码子，才能成功表达出IL-2-HSA融合蛋白．
（4）应用抗原-抗体杂交技术可检测酵母菌是否表达出IL-2-HSA融合蛋白．
分析 分析题图：①表示从人的外周学细胞去mRNA；②表示以mRNA为模板逆转录形成cDNA的过程；③表示基因表达载体的构建过程，需要限制酶和DNA连接酶．目的基因IL-2cDNA的两端的酶切位点分别是EcoRⅠ和BglⅡ，所以表达载体1也必须有这两个酶切位点，而表达载体1上已有EcoRⅠ，因此位点a应含有BglⅡ．
解答 解：（1）分析图解可知，图中②表示由mRNA为模板合成DNA的过程，即表示逆转录过程，③过程表示基因表达载体的构建，该过程需要限制酶和DNA连接酶，根据目的基因上的限制酶的切割位点可知，限制酶应包括限制酶EcoRI、限制酶BglⅡ．
（2）限制酶的功能是识别双链DNA分子中特定的脱氧核苷酸序列，并断开两个特定的脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键；目的基因IL-2cDNA和表达载体1在构建表达载体2时需先用限制酶切割让二者获得相同的黏性末端，然后在DNA连接酶的作用下重新组合．根据目的基因IL-2cDNA的两端的酶切位点分别是EcoRⅠ和BglⅡ，所以表达载体1也必须有这两个酶切位点，而表达载体1上已有EcoRⅠ，因此位点a应含有BglⅡ．
（3）融合基因转录出的mRNA中与IL-2蛋白对应的碱基序列中不能含有终止密码，才能成功表达出IL-2-HsA融合蛋白．否则HSA蛋白将无法合成．
（4）应用抗原-抗体杂交技术可检测酵母菌是否表达出IL-2-HSA融合蛋白．
故答案为：
（1）逆转录 限制酶EcoRI、限制酶BglⅡ和DNA连接
（2）双链DNA分子中特定的脱氧核苷酸序列，两个特定的脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键 a
（3）终止
（4）抗原-抗体杂交
点评 本题结合流程图，考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的概念、原理及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节，能正确分析题图，再结合所学的知识准确答题．
阅读快车系列答案| A． | 核糖体 | B． | 线粒体 | C． | 拟核 | D． | 高尔基体 |
| A． | 光合作用需要光 | B． | 光合作用需要CO2 | ||
| C． | 光合作用能产生O2 | D． | 光合作用需要叶绿体 |
| A． | M细胞无线粒体，只能进行无氧呼吸 | |
| B． | N细胞的遗传物质可能为DNA或RNA | |
| C． | M、P细胞一定是取材于异养型的生物 | |
| D． | N、P细胞均有发生染色体变异的可能 |
| A． | 2mol | B． | 20mol | C． | 12mol | D． | 6mol |
| A． | 神经系统的某些结构也能释放激素 | |
| B． | 免疫系统既是机体的防御系统，也是维持稳态的调节系统 | |
| C． | 免疫系统释放的免疫活性物质主要包括抗体、淋巴因子、溶菌酶等 | |
| D． | 图乙中三大系统产生的信号分子进入内环境后只被本系统细胞、器官识别 |
| A． | 为了满足人们需求，随意从国外引进多种宠物 | |
| B． | 为控制大米草在我国造成的灾害，将其天敌引入我国 | |
| C． | 为保护牧场防止沙漠化，灭绝危害草原的鼠类和昆虫 | |
| D． | 将大熊猫迁入动物园繁育，将部分大熊猫进行野外回归实验 |