Question

观察下图，回答如下问题：

   （1）步骤①和②中常用的工具酶是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿和＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

   （2）图中质粒上有抗氨苄青霉素和抗四环素两个标记基因，经过①和②步骤后，有些质粒上的＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿基因内插入了外源目的基因，形成重组质粒，由于目的基因的分隔使得该抗性基因失活。

   （3）步骤③是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿的过程，为了促进该过程，应该用＿＿＿＿＿处理大肠杆菌。

   （4）步骤④：将二角瓶内的大肠杆菌接种到含四环素的培养基C上培养，目的是筛选＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿，能在C中生长的肠杆菌有＿＿＿种。

   （5）步骤⑤：用无菌牙签桃取C上的单个菌落，分别接种到C（含氨苄青霉素和四环素和E（含四环素）两个培养基的相同位置上，一段时间后，菌落的生长状况如图所示。含目的基因的菌落位于＿＿＿（D、E）上，请在图中相应的位置上圈出来。

Answer 1

（18分）（1）限制性核酸内切酶   DNA连接酶

   （2）氨苄青霉素抗性基因

   （3）将重组质粒（目的基因）导入人肠秆菌（受体细胞） CaCl₂溶液

   （4）含圆环素抗性基因的人肠杆菌（含抗性基因的大杆菌给分，但回答含目的基因的人肠杆菌不给分）   2

   （5）E

解析:

（1）步骤①和②是基因工程的第二步，将目的基因与运载体充足形成重组的运载体。需要的工具酶有剪刀和针线，即限制性内切酶和DNA连接酶。

（2）经过①和②步骤中由图知外源目的基因插入在抗氨苄青霉素基因的中间，形成重组质粒，由于目的基因的分隔使得该抗氨苄青霉素失活。

（3）步骤③是将重组的质粒导入到锥形瓶的大肠杆菌中，即使将重组的质粒导 入受体细胞的过程。由于运载体不是噬菌体，而是质粒，让质粒进入大肠杆菌细胞内中，一般用CaCl₂溶液增大大肠杆菌的通透性。

（4）步骤④到含四环素的培养基C上培养，有抗四环素的就能生存下来，没有抗四环素的就不能。这样就可以筛选抗四环素的大肠杆菌。能存活的有普通质粒（抗性基因没有被破坏），和目的基因不在抗四环素基因的中间插入，因此有两种。

（5）步骤⑤：用无菌牙签桃取C上的单个菌落，分别接种到C（含氨苄青霉素和四环素和E（含四环素）两个培养基的相同位置上，在C上存活的是普通质粒两个抗性基因都没被破坏，在E上存活的是只要抗四环素基因没有被破坏就可以。由步骤①和 ②知，目的基因与质粒重组，插入的位置在抗氨苄青霉素基因中间，因此抗氨苄青霉素的功能没有，抗四环素基因没有被破坏，他 的抗性具有。因此选E，在C图中没有的两个点能在E图中出现的便是。