Question

生物柴油是一种可再生的清洁能源，其应用在一定程度上能够减缓人类对化学燃料的消耗．科学家发现，在微生物M产生的脂肪酶作用下，植物油与甲醇反应能够合成生物柴油（如图）．

（1）筛选产脂肪酶的微生物M时，培养基中添加的植物油为微生物生长提供

 

．该培养基在功能上属于

 

培养基，在物理形态上属于

 

培养基．
（2）通常情况下，在微生物培养过程中，获得纯净培养物的关键是

 

．培养基灭菌采用的最适方法是

 

法．无菌技术要求实验操作应在酒精灯

 

附近进行，以避免周围环境中微生物的污染．在接种前需要检测培养基是否被污染．对于固体培养基应采用的检测方法是

 

．
（3）测定培养液中微生物数量，可选用

 

法直接计数．从微生物M分离提取的脂肪酶通常需要检测

 

，以确定其应用价值．同时可利用固定化细胞技术使脂肪酶能够重复使用，固定化细胞技术一般采用的方法是

 

．在配制海藻酸钠溶液时，要注意

 

，否则可能出现焦糊．
（4）①若需体外扩增脂肪酶基因，可应用耐热DNA聚合酶催化的

 

技术．
②该技术过程的三个步骤：

 

、

 

和

 

（按顺序）．
③在获得单链模板的方式上，该技术与体内DNA复制不同，前者通过

 

解开双链，后者通过

 

解开双链．
④DNA鉴定时，可以使用

 

试剂并在沸水中加热反应产生蓝色．

Answer 1

考点：微生物的分离和培养,测定某种微生物的数量,PCR技术的基本操作和应用

专题：

分析：微生物的营养物质主要有碳源、氮源、水和无机盐等，筛选菌株时需要用选择培养基；培养基按其物理形态可以分为液体培养基、固体培养基和半固体培养基．微生物培养的关键是无菌操作，防止杂菌污染．测定培养液中微生物数量，可选用显微镜直接计数 法直接计数；固定化细胞技术包括包埋法、化学结合法和物理吸附法．PCR技术的三个步骤是变性、复性和延伸；DNA鉴定时可以用二苯胺试剂．

解答： 解（1）筛选产脂肪酶的微生物M时，培养基中添加的植物油为微生物生长提供碳源，需要用选择培养基，属于固体培养基．
（2）在微生物培养过程中，获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，培养基需要用高压蒸汽灭菌法灭菌，接种过程始终要在酒精灯火焰旁进行．检测培养基被污染的方法是：将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生．
（3）测定培养液中微生物的数量，可选用显微镜直接计数法直接计数．提取的脂肪酶在应用于实验或生产之前，要先检测其活性，以确定其应用价值．固定化可以用包埋法．配制海藻酸钠溶液时，需要用用小火间断加热防止出现焦糊．
（4）①在应用PCR技术扩增DNA片段时，DNA合成（延伸）时温度要控制在72℃，需要具有较强的耐热性的DNA聚合酶催化．
 ②PCR技术的三个步骤是变性、复性和延伸．
③PCR技术是通过高温解开DNA双链，DNA复制是通过解旋酶解开DNA双链．
④DNA鉴定时可以用二苯胺试剂．
故答案为：
（1）碳源   选择   固体   
（2）防止外来杂菌的入侵    高压蒸汽灭菌     火焰     将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生
（3）显微镜直接计数         酶活性（或：酶活力）        包埋法     用小火间断加热
（4）①PCR（或：多聚酶链式反应，聚合酶链式反应）    
②变性      复性     延伸 
③高温     解旋酶
④二苯胺

点评：本题主要考查菌种的筛选与计数，固定化细胞核PCR技术等，意在提高学生对相关知识点的识记与理解能力．