题目内容
【题目】为了调查银川市自来水水源地的水质情况，某研究小组对该地自来水水样中的大肠杆菌进行了测定，请回答下列问题：
(1)该小组采用平板划线法分离提纯水样中的细菌，划线时在培养基上共画了4个区域，则需要________次灼烧接种环。在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线，这样做的目的是________________________________________。
(2)在纯化菌种时，所用的培养基都需要在接种前用____________法进行灭菌。将1mL水样稀释1000倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液，经适宜条件下培养后，3个平板上的菌落数分别为51、50和49。据此可得出每升水样中的活菌数为____________。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种____________作为对照进行实验。
(3)菌种需临时保藏时，要先将菌种接种到试管的___________培养基上，在合适的温度下培养。当菌落长成后，将试管放入_______冰箱中保藏。但此方法存在的缺点是_________________________。
（4）在培养时，需将培养皿倒置并放在___________中。实验结束时，使用过的培养基应该进行__________处理后才能丢弃。
【答案】5 将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面高压蒸汽灭菌法5.0×108等量的无菌水固体斜面4℃保存的时间不长，菌种容易被污染或产生变异恒温培养箱灭菌
【解析】
本题考查微生物的实验室培养，需掌握微生物的接种、灭菌、保藏、计数等相关知识，需归纳总结记忆。
（1）采用平板划线法纯化微生物时，每次划线之前都要灼烧接种环，划线结束后还需灼烧接种环，若划线时在培养基上共画了4个区域，则需要5次灼烧接种环；每次划线前都要灼烧接种环的目的是杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端，这样可以将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
（2）在纯化菌种时，所用的培养基都需要在接种前用高压蒸汽灭菌法进行灭菌；将1mL水样稀释1000倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液，经适宜条件下培养后，3个平板上的菌落数分别为51、50和49。首先求出3个平板的平均菌落数即(51+50+49)÷3=50，然后利用公式(C/V) ×M，即可得出每升水样中的活菌数=（50/0.1）×1000×1000=5.0×108；要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种无菌水作为对照进行实验，这样做的目的是检测培养基平板灭菌是否合格。
(3)菌种需临时保藏时，要先将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，在合适的温度下培养。当菌落长成后，将试管放入4℃冰箱中保藏。但此方法存在的缺点是保存的时间不长，菌种容易被污染或产生变异。
（4）在培养时，需将培养皿倒置并放在恒温培养箱中。实验结束时，使用过的培养基应该进行灭菌处理后才能丢弃。
烧灼时期 | 目的 |
取菌种前 | 杀死接种环上原有微生物 |
每次划线前 | 杀死上次划线后接种环上残留菌种，使下次划线的菌种直接来自于上次划线末端，使每次划线菌种数目减少，达到分离菌株的目的 |
接种结束后 | 杀死接种环上残存的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者 |
