Question

【题目】回答有关生物技术的问题． Ⅰ、抗体的制备经历了细胞学层面和分子学层面两种合成途径的研究．下列是生物学技术制备抗体的两个途径模式简图．

Ⅱ、上图中，结构甲的建构可用图1和2表示．图1表示含有目的基因的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列．现有4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为如表所示．

限制酶	MspⅠ	BamHⅠ	MboⅠ	SmaⅠ
识别序列及切割位点

（1）在获取抗体之前，需要向健康人体注射特定抗原（如乙肝疫苗），并且每隔一周重复注射一次．免疫学称细胞A为 ， 该细胞在人体主要介导免疫．
（2）过程①至②抗体的获取称为 ， 其中①是过程，Y细胞称为 ．
（3）若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段，其产物长度为 ．
（4）若图1中虚线方框内的碱基对被T﹣A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d．从杂合子中分离出图1及对应的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，产物中共有种不同长度的DNA片段．
（5）上述结构中的建构过程可知，在限制酶作用下得到的产物有多种，生产上多采用技术来降低目的基因分离提取的难度，也有利于限制酶的回收和再利用．
（6）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行拼接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是 ． 在导入重组质粒后，为了筛选出含有重组质粒的大肠杆菌，一般需要添加的（固体/液体）培养基进行培养．在培养前，培养基必须先经过灭菌，所用的方法是；采用的方法接种以获得单菌落后继续筛选．

Answer 1

【答案】
（1）浆细胞（效应B淋巴细胞）；体液
（2）单克隆抗体；细胞融合；杂交瘤细胞
（3）537，790，661
（4）4
（5）酶的固定化
（6）BamHⅠ；抗生素B；固体；高压灭菌；划线（或涂布）
【解析】解：（1）向健康人体注射特定抗原，提取出A浆细胞（效应B淋巴细胞），在人体参与体液免疫．（2）过程①至②抗体的获取称为单克隆抗体，其中①是细胞融合过程，Y细胞称为杂交瘤细胞．（3）SmaⅠ识别的序列为GGGCCC，切割会产生平末端；图1中DNA片段含有两个SmaⅠ识别位点，第一个识别位点在左端534 bp序列向右三个碱基对的位置；第二个识别位点在右端658bp序列向左三个碱基的位置，从而两个位点切割后产生的DNA片段的长度分布为534+3，796﹣3﹣3，658+3，即得到的DNA片段长度为537、790、661．（4）在杂合子体内含有基因D和基因d，基因D的序列中含有两个识别位点，经过SmaI完全切割会产生537bp、790bp和661bp三种不同长度的片段，基因d的序列中含有一个识别位点，经过切割后会产生1327bp和661bp两种长度的片段，综上，杂合子中分离到该基因的DNA片段经过切割后会产生4种不同长度的片段．（5）固定化酶的优点：①既能与反应物接触，又能与产物分离；②可以反复利用．（6）能够获取目的基因并切开质粒的限制酶有识别序列为GGATCC的BamH I和识别序列为GATC的MboI，若使用Mbo I会同时破坏质粒中的抗生素A抗性基因和抗生素B抗性基因，所以要用BamH I来切割目的基因和质粒，切割后保留了完整的抗生素B抗性基因，便于筛选出含有重组质粒的大肠杆菌．因为目的基因和运载体是用同种限制酶切割的，目的基因两端的末端和质粒切割后的两个末端都能进行互补，可能出现目的基因反向连接在运载体上的情况，导致基因D不能正确表达．在培养前，培养基常用高压灭菌灭菌；采用划线（或涂布）的方法接种以获得单菌落后继续筛选． 所以答案是：（1）浆细胞（效应B淋巴细胞） 体液（2）单克隆抗体 细胞融合 杂交瘤细胞（3）537，790，661（4）4（5）酶的固定化（6）BamHⅠ 抗生素B 固体 高压灭菌 划线（或涂布）
【考点精析】根据题目的已知条件，利用基因工程的原理及技术和单克隆抗体的制备的相关知识可以得到问题的答案，需要掌握基因工程的原理是利用DNA重组技术；对免疫小鼠注射特定的抗原蛋白；提取B淋巴细胞；同时用动物细胞培养的方法培养骨髓瘤细胞并提取；促使它们细胞融合；在特定的选择培养基上筛选出融合的杂种细胞；然后对它进行克隆化培养和抗体检测；最后将杂交瘤细胞在体外做大规模培养或注射入小鼠腹腔内增殖，从细胞培养液或小鼠腹水中可得到大量的单克隆抗体．