Question

2．重组酵母菌乙肝疫苗就是利用基因工程技术使乙肝病毒相关基因在酵母菌内表达并大规模培养，从而提取制成疫苗．
（1）下图是获取目的基因的流程：

①图中基因组文库大于（小于/等于/大于）cDNA文库．
②B过程需要的酶是逆转录酶；A、C过程中可以 （可以/不可以）使用同一种探针筛选含目的基因的菌株．
③目的基因Ⅰ和Ⅱ除从构建的文库中分离外，还可以分别利用图中DNA和cDNA为模板直接进行PCR扩增，该过程中所用酶的显著特点是耐高温．
（2）构建基因表达载体时用限制酶切割DNA后可能产生黏性末端，也可能产生平末端，后者需用T₄（E•coil/T₄） DNA连接酶通过催化磷酸二酯键使目的基因与质粒连接起来．为使目的基因在酵母菌细胞中高效表达，需要把来自cDNA文库的目的基因片段正确插入表达载体的启动子和终止子之间．
（3）在导入表达载体时常用Ca⁺处理酵母菌，使其成为感受态细胞，再与表达载体于缓冲液中混合，在一定的温度下完成转化．
（4）为了检测目的基因是否成功翻译，可以用抗原-抗体杂交技术，若没有出现相应的杂交带，则可能需要用带标记的目的基因做探针来检测是否转录出mRNA．

Answer 1

分析 分析题图：A表示从基因组文库中获取含有目的基因的菌株；B表示逆转录过程，需要逆转录酶；C表示从基因组文库中筛选获得含有目的基因的菌株．基因组文库是指将某生物的全部基因组DNA切割成一定长度的DNA片段克隆到某种载体上形成的信使，而cDNA文库是由mRNA经逆转录形成的基因组成的，由于基因的选择性表达，所以cDNA文库小于基因组文库．

解答 解：（1）①基因组文库包含某种生物所有的基因，而cDNA文库是由mRNA经逆转录形成的基因组成的，由于基因的选择性表达，cDNA文库只包含某种生物部分基因，所以cDNA文库小于基因组文库．
②B过程是逆转录过程，需要逆转录酶．根据碱基互补配对原则，A、C过程可以使用同一种探针筛选含目的基因的菌株．
③目的基因Ⅰ和Ⅱ除从构建的文库中分离外，还可以分别利用图中DNA和cDNA为模板直接进行PCR扩增．PCR技术是在高温条件下进行的，该过程中所用酶要耐高温．
（2）T₄DNA连接酶能连接平末端的磷酸二酯键，使目的基因与质粒连接起来．为使目的基因在酵母菌细胞中高效表达，需要把来自cDNA文库的目的基因片段正确插入表达载体的 启动子和终止子之间．
（3）将目的基因导入微生物细胞时，常用Ca⁺处理酵母菌，使其成为易于吸收周围环境中DNA分子的感受态细胞，再与表达载体于缓冲液中混合，在一起的温度下完成转化．
（4）检测目的基因是否整合到受体细胞的染色体上，可通过DNA分子杂交技术进行检测；检测目的基因是否转录形成mRN，可通过分子杂交技术进行检测．这两种技术都需要用带标记的目的基因做探针．检测目的基因是否成功翻译，可以用抗原-抗体杂交技术．
故答案为：
（1）①大于       ②逆转录酶     可以        ③DNA     cDNA          耐高温
（2）T₄         磷酸二酯       启动子         终止子
（3）感受态
（4）抗原-抗体杂交        带标记的目的基因

点评 本题考查基因操作的基本过程弄清cDNA文库和基因组文库的差别、基因表达载体的构成、目的基因获取途径和导入受体细胞的方法是正确解答该题的前提．