Question

8．科学研究表明，氮素是水和土壤中重要的污染因子，氮肥经土壤微生物分解后产生的氨对雾霾的贡献率达20%以上，农业污染逐渐引起科学界和政府的重视．为研究土壤微生物对氮素的分解作用，某研究人员分别对所取土样进行分解尿素的细菌的分离纯化操作（A组）和土壤微生物计数操作（B组），过程如图一，序号①〜⑨表示实验步骤．

（1）步骤①所用的小铁铲需采用干热灭菌法进行灭菌处理，称取土样时通常需在火焰（或酒精灯火焰）旁进行．
（2）分析步骤③、④所用的培养基的成分，最大的区别是氮源（成分）种类不同．
（3）对分离出的细菌进行长期保存，常采用的方法是甘油管藏法．
（4）图二所示的接种方法可以在图一的步骤⑤（填序号）中采用，甲、乙、丙为划线的三个区域，为正确完成接种过程，接种环至少进行4次灼烧灭菌．
（5）步骤⑦中，对1mL菌液进行系列稀释10、100、1000倍，分别经过步骤⑧的接种和培养后，观察到菌落的平均数依次为2860、257、23，则可推测适宜的土样稀释倍数为1000倍，原因是步骤⑦的稀释倍数为100倍时形成的菌落平均数在30〜300之间，步骤②已稀释了10倍，共稀释了1000倍．

Answer 1

分析 1、无菌技术的主要内容
①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒；
②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌
③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行；
④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触．
2、检测土壤中细菌总数，可以看出采用的计数方法是稀释涂布平板法进行计数．用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数时，在每一个梯度浓度内，至少要涂布3个平板，选择菌落数在30～300的进行记数，求其平均值，再通过计算得出土壤中细菌总数．

解答 解：（1）步骤①所用的小铁铲需采用干热灭菌法进行灭菌处理，称取土样时通常需在火焰（或酒精灯火焰）旁进行，从而防止杂菌的污染．
（2）步骤③为扩大培养，而步骤④为选择培养基，选择培养使用的培养基为选择培养基，因此所用的培养基的成分，最大的区别是氮源种类不同，即选择培养基中需要以尿素作为唯一氮源．
（3）对分离出的细菌进行长期保存，常采用甘油管藏法．
（4）图中步骤⑧接种后需要计数，只能使用稀释涂布平板法．而图二表示平板划线法，可以在图一的步骤⑤中采用，甲、乙、丙为划线的三个区域，为正确完成接种过程，在每次接种前和接种后均需要灼烧灭菌，因此接种环至少进行4次灼烧灭菌．
（5）步骤⑦中，对1mL菌液进行系列稀释10、100、1000倍，分别经过步骤⑧的接种和培养后，观察到菌落的平均数依次为2860、257、23，步骤⑦的稀释倍数为100倍时形成的菌落平均数在30〜300之间，步骤②已稀释了10倍，共稀释了1000倍．
故答案为：
（1）干热灭菌        火焰（或酒精灯火焰）
（2）氮源
（3）甘油管藏法
（4）⑤4
（5）步骤⑦的稀释倍数为100倍时形成的菌落平均数在30〜300之间，步骤②已稀释了10倍，共稀释了1000倍

点评 本题考查了微生物的分离和培养的有关知识，要求考生识记无菌技术的主要内容，识记接种微生物常用的两种方法，能结合所学的知识准确答题．